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文檔簡介
1、結核分枝桿菌耐藥問題已引起世界廣泛關注,從對異煙肼、利福平、乙胺丁醇、鏈霉素等一線藥物耐藥,到目前廣泛發(fā)生對二線藥物卡那霉素、阿米卡星等耐藥,產(chǎn)生多重耐藥結核桿菌(multi-drug resistance tuberculosis,MDR-TB),甚至廣泛耐藥結核桿菌(extensively drug-resistant tuberculosis,XDR-TB)。結核分枝桿菌對作為二線主要藥物的氨基糖苷類抗菌藥物的耐藥機制為多種修飾酶
2、的產(chǎn)生,以及由16SrRNA介導的藥物作用靶位改變。本研究即選取與耐藥相關代表酶的編碼基因,以臨床分離耐藥株為研究對象,與結核分枝桿菌標準株H37Rv及臨床分離敏感株進行比對,找尋與耐藥相關的基因突變位點,了解結核分枝桿菌基因突變對氨基糖苷類抗菌藥物的耐藥作用機制。結核分枝桿菌感染宿主后,宿主體內(nèi)的T淋巴細胞發(fā)揮主要的細胞免疫防御功能。T淋巴細胞相關指標的變化往往與結核分枝桿菌致病程度、化療效用密切相關,這種變化在對藥物耐藥與敏感的病人
3、身上是否有所變化,具體的變化情況如何?我們以臨床資料為基礎,進行了相關研究。
1、結核分枝桿菌氨基糖苷抗菌藥物耐藥基因突變研究
探討結核分枝桿菌eis、aac(2')-Ic、tlyA基因突變與氨基糖苷抗菌藥物耐藥之間的相互關系。我們以已確定耐一線藥物(異煙肼、利福平、乙胺丁醇、鏈霉素)的結核分枝桿菌臨床分離株為研究對象,應用BACTECMGIT960測定其二線藥物(阿米卡星、卡那霉素等)的耐藥情況,同時應用基因測序的
4、方法測定結核分枝桿菌eis、aac(2')-Ic、tlyA基因突變情況,分析基因突變與氨基糖苷抗菌藥物耐藥之間的相互關系。結果顯示:
?、僭诎被擒漳退幍牟糠纸Y核分枝桿菌中,eis基因487位堿基出現(xiàn)突變,相應的163位氨基酸密碼子由CGT突變?yōu)镃AT,即由纈氨酸變?yōu)楫惲涟彼?。eis基因V163I突變(纈氨酸變?yōu)楫惲涟彼幔┛赡芘c結核分枝桿菌耐氨基糖苷類藥物有關。
?、赼ac(2')-Ic基因沒有發(fā)現(xiàn)突變,仍需要增加樣本的
5、含量或者延長基因測定范圍。
?、鬯信R床分離菌株tlyA基因33位堿基由A突變?yōu)镚,相應的密碼子由CTA突變?yōu)镃TG,均為亮氨酸同義突變,標準菌株H37Rv未見tlyA基因突變,tlyA基因33位堿基突變有可能作為區(qū)分結核分枝桿菌臨床分離株與標準株的標志之一。
2、結核病人T細胞亞群分析
以臨床病人資料為基礎,按照初治、復治及結核分枝桿菌耐藥情況進行分組,分為初治耐藥組,初治敏感組,復治耐藥組。采用BACTE
6、CMGIT960系統(tǒng)進行藥敏測定;流式細胞儀檢測外周血T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+細胞絕對值及百分比、CD4+/CD8+值。數(shù)據(jù)全部采用SPSS16.0統(tǒng)計學軟件處理。各組間差異顯著性分析采用多變量方差分析(MANOVA),以P<0.05為具有統(tǒng)計學意義。結果顯示T細胞數(shù)量及亞型、白細胞(含中性粒細胞、淋巴細胞)數(shù)量在各組之間均無統(tǒng)計學意義。本研究由于樣本容量等原因并不能說明T細胞免疫功能在結核分枝桿菌耐藥方面的影響及作用
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