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文檔簡介
1、目的:研究蟾酥膠囊含藥血清對(duì)人肝癌BEL-7402細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用及蛋白Bcl-2、Fas、Apo2.7在肝癌凋亡細(xì)胞中的表達(dá),探討蟾酥膠囊誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞凋亡的可能機(jī)制。 方法:選用純種成年新西蘭大白兔20只,隨機(jī)分為兩組,每組10只,用血清藥理學(xué)方法,一組制備含藥血清,另一組制備無藥血清。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞分別加10%、20%、30%含藥血清,對(duì)照組細(xì)胞加10%無藥血清,分別孵育24h、48h,顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;用臺(tái)盼藍(lán)染
2、色檢測細(xì)胞藍(lán)染率;MTT(四甲基偶氮唑鹽)比色法檢測細(xì)胞抑制率;流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞周期變化及Apo2.7蛋白的陽性表達(dá)率;免疫細(xì)胞化學(xué)法染色檢測蛋白Bcl-2、Fas的陽性表達(dá)率。 結(jié)果:相差顯微鏡下可見,實(shí)驗(yàn)組部分細(xì)胞變小、變圓,貼壁能力明顯下降,呈漂浮生長狀態(tài),集落生長特性明顯降低,呈單個(gè)生長狀態(tài);臺(tái)盼藍(lán)染色顯示,細(xì)胞藍(lán)染率無明顯變化;MTT比色顯示,細(xì)胞存活率降低,細(xì)胞增殖明顯受到抑制;流式細(xì)胞儀檢測,可見明顯
3、的凋亡峰,細(xì)胞周期中G1、S期下降,G2/M期升高,Apo2.7蛋白表達(dá)增高,細(xì)胞凋亡率隨著藥物作用時(shí)間及含藥血清濃度的改變而改變;免疫細(xì)胞化學(xué)法染色顯示,Bcl-2蛋白表達(dá)降低,F(xiàn)as蛋白表達(dá)升高。各實(shí)驗(yàn)組的上述檢測指標(biāo)與對(duì)照組相比較,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論:蟾酥膠囊含藥血清可以誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞BEL-7402凋亡,且細(xì)胞凋亡率與藥物作用時(shí)間和含藥血清濃度呈一定的時(shí)效和量效關(guān)系;探討其誘導(dǎo)機(jī)制發(fā)現(xiàn),可能與下調(diào)Bc
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