Wnt-β-catenin通路介導(dǎo)MSCs對(duì)損傷心肌細(xì)胞凋亡影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、[目的]
  通過(guò)提取培養(yǎng)心肌細(xì)胞及建立損傷心肌細(xì)胞模型,研究Wnβ-catenin信號(hào)通路是否參與心肌細(xì)胞凋亡,并將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與損傷心肌細(xì)胞共培養(yǎng),進(jìn)一步探討Wnt/β-catenin信號(hào)通路及心肌細(xì)胞凋亡的變化,為損傷心肌細(xì)胞的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療提供一定的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
  [方法]
  應(yīng)用酶消化法及差速貼壁法獲得乳鼠原代心肌細(xì)胞,用免疫組化法檢測(cè)所獲得細(xì)胞中有無(wú)α-橫紋肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth mu

2、scle actin,α-SMA)以鑒定心肌細(xì)胞。用1mg/L阿霉素(Adriamycin,ADR)建立損傷心肌細(xì)胞模型[1],據(jù)不同的損傷時(shí)間將心肌細(xì)胞分為A、B、C、D四組,A: ADR損傷心肌細(xì)胞12h,B: ADR損傷心肌細(xì)胞24h,C:ADR損傷心肌細(xì)胞48h,D:正常心肌細(xì)胞組,應(yīng)用Western blot法檢測(cè)各組的Wnt2、β-catenin及p53蛋白的表達(dá)差異。
  進(jìn)一步分離、鑒定并培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bo

3、ne marrowmesenchymal stem cells,BMSCs),將心肌細(xì)胞分為三組:E:正常心肌細(xì)胞組,F(xiàn):損傷心肌細(xì)胞組,G: BMSCs與損傷心肌細(xì)胞共培養(yǎng)組。應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組心肌細(xì)胞凋亡率,應(yīng)用Western blot法檢測(cè)β-catenin、c-myc、p53蛋白的表達(dá)。
  [結(jié)果]
  1.對(duì)獲得的乳鼠原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)后進(jìn)行α-橫紋肌肌動(dòng)蛋白檢測(cè),染色呈陽(yáng)性,提示體外培養(yǎng)的細(xì)胞為心肌細(xì)胞。

4、r>  2.對(duì)A、B、C、D四組進(jìn)行wnt2、β-catenin及p53蛋白檢測(cè),結(jié)果顯示,wnt2蛋白在A、B、C組的表達(dá)量分別為0.24+0.04、1.15+0.05、0.35+0.05,β-catenin蛋白在A、B、C組的表達(dá)量分別為0.21+0.04、0.34+0.04、0.71+0.04,p53蛋白在A、B、C組的表達(dá)量分別為0.17+0.03、0.61+0.40、0.83+0.04,wnt2、β-catenin及p53蛋白

5、在A、B、C組的表達(dá)量逐漸增加,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。Wnt-2、β-catenin和p53在D組中無(wú)表達(dá),Wnt-2和β-catenin相關(guān)系數(shù)為0.314、wnt2和p53相關(guān)系數(shù)為0.584,其中p53與β-catenin的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.940),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。推測(cè)Wnt/β-catenin信號(hào)通路參與心肌細(xì)胞的損傷過(guò)程。
  3.E組心肌細(xì)胞凋亡率為(0.74±0.65)%,

6、F組為(26.58±3.89)%,G組為(7.72±0.90)%,經(jīng)兩兩比較發(fā)現(xiàn),F(xiàn)組的凋亡率高于E、G組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
  4.E組β-catenin、c-myc及p53三種蛋白表達(dá)不能測(cè)出,F(xiàn)組的β-catenin,c-myc,p53蛋白表達(dá)水平均高于G組,兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。β-catenin與c-myc的相關(guān)系數(shù)為0.942、β-catenin和p53的相關(guān)系數(shù)為0.852,c-

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