梅毒血清固定患者外周血Th22細胞及IL-22的表達.pdf

1、目的:梅毒（syphilis）一種常見的、慢性的、經(jīng)典的性傳播疾病,并能對全身組織都能造成不可逆的損傷，是我國目前發(fā)病率最高的性傳播疾病之一。近些年來，我國梅毒的發(fā)病率呈現(xiàn)逐步上升的勢態(tài)，對于梅毒的診治受到關注。通常梅毒患者在經(jīng)過正規(guī)的驅(qū)梅治療后，患者臨床癥狀消失，梅毒血清學試驗中非梅毒螺旋體血清實驗（如RPR、USR等）可在3-6個月內(nèi)轉(zhuǎn)為陰性。而在臨床中我們發(fā)現(xiàn)有部分患者在經(jīng)過正規(guī)驅(qū)梅治療后雖然臨床癥狀消失，但是在隨訪過程中非梅毒螺

2、旋體血清學試驗在很長時間內(nèi)仍然為陽性，未能轉(zhuǎn)陰，即表現(xiàn)為血清固定(Serofast)。這種現(xiàn)象已成為在臨床驅(qū)梅治療中面臨挑戰(zhàn)之一，也同時會對患者心理產(chǎn)生巨大負擔。梅毒血清固定的機制目前尚未完全清楚，梅毒血清固定的發(fā)生目前多認為與細胞免疫存在聯(lián)系，而Th22細胞及其主要的效應分子IL-22已被證明在識別和攻擊入侵機體的病毒和病原體或針對炎癥反應做好自我保護方面起著特殊的作用。關于Th22及IL-22在梅毒血清固定發(fā)生機制中的研究國內(nèi)外未見

3、報道。本課題通過對梅毒血清固定患者及梅毒血清轉(zhuǎn)陰患者的外周血中Th22細胞及血清IL-22水平的表達的分析，為梅毒血清固定發(fā)生機制的研究提供一個新的視角，也將能為更好處理梅毒血清固定現(xiàn)象提供新的思路。
　　方法：收集2013年12月-2014年12月期間就診于華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬協(xié)和醫(yī)院皮膚科門診的患者，30例確診為梅毒血清固定患者為病例組及30例經(jīng)正規(guī)治療后非梅毒螺旋體血清學試驗轉(zhuǎn)陰的患者為對照組，分別進行靜脈采血，我院在

4、梅毒治療后對非梅毒螺旋體血清學檢查指標為RPR,轉(zhuǎn)陰與否也是用此指標來衡量。入組標準：1.梅毒血清固定確診患者；2.就診時HIV抗體試驗陰性；3.已經(jīng)過正規(guī)的驅(qū)梅治療；4.隨訪期間未發(fā)生不潔性行為；5.隨訪期間未出現(xiàn)再感染或復發(fā)；6.隨訪期間無梅毒臨床表現(xiàn)；7.RPR持續(xù)陽性早期梅毒6個月，晚期梅毒12個月以上；8.腦脊液VDRL、FAT-Ab、TPPA均為陰性。排除標準：1.隨訪期間出現(xiàn)梅毒臨床表現(xiàn)；2.近兩月內(nèi)使用糖皮質(zhì)激素及免疫抑

5、制劑；3.伴有可致生物學假陽性的急性或慢性疾病；4.腦脊液檢查異常；5.有內(nèi)臟梅毒感染。病例組30例，其中男性13例，女性17例，年齡在18-60歲，平均年齡35.3±12.22歲，對照組30例，其中男性18例，女性12例，年齡在20-58歲，平均年齡30±8.74為歲。經(jīng)t檢驗，對照組的年齡、性別與病例組之間無明顯差異。外周血中Th22細胞的檢測方法：采集病例組及對照組患者的肘靜脈血各4ml放入肝素鈉抗凝管中，分離得到外周血單個核細胞

6、（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC），然后再向其中先后加入莫能霉素（Monenosinsolution）、佛波醇-12-肉寇酯-13-乙醇（Phorbol-12-myristate-13-acetate PMA）、離子霉素（Ionomycin）置于37℃，5％二氧化碳孵育箱中刺激培養(yǎng)5小時，然后進行細胞表面染色、固定、透化破膜及胞內(nèi)細胞因子染色，最后通過流式細胞儀測定Th22細胞所占淋巴細胞的

7、百分比。血清中IL-22的檢測方法：采集病例組及對照組患者的肘靜脈血各3ml放入EDTA抗凝管中，離心后將收集血清標本置于-80℃的冰箱中保存。采用雙抗體夾心ELISA法檢測所收集到的血清標本中IL-22的表達水平。最后應用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學分析，對病例組及對照組的兩種數(shù)據(jù)進行t檢驗，分析外周血中Th22細胞及血清中的IL-22的表達水平在病例組及對照組之間是否存在統(tǒng)計學差異。檢驗水準取P<0.05有意義。
　　結(jié)果：

8、
　　1、流式細胞學檢測結(jié)果(%):外周血中Th22細胞表達比例在病例組(3.56±0.22)與對照組(3.40±0.20)之間無統(tǒng)計學意義(t=1.712 P=0.104P＞0.05)；
　　2、雙抗體夾心ELISA方法檢測結(jié)果(pg/ml):血清中IL-22的表達在病例組(11.77±1.88)與對照組(14.41±1.28)之間存在統(tǒng)計學意義(t=-3.659 P=0.002 P＜0.01)。
　　結(jié)論:

9、　　1、外周血中Th22細胞表達可能與梅毒血清固定的發(fā)生無直接相關性；或者說發(fā)生梅毒血清固定的患者外周血中Th22細胞可能為活化的效應性T細胞，能向外分泌各種效應性細胞因子而在疾病的發(fā)生與發(fā)展中發(fā)揮作用，而對照組外周血中存在是無功能性的Th22細胞，既未被激活的Th22細胞。故Th22細胞在外周血百分比在血清固定患者組與非梅毒螺旋體血清學試驗轉(zhuǎn)陰患者組之間無差異；
　　2、梅毒血清固定患者病例組血清中IL-22的表達量低于非梅毒螺