胃癌CHFR、RUNX3基因啟動(dòng)子區(qū)異常甲基化的研究.pdf

1、目的：本研究通過(guò)檢測(cè)胃癌組織、癌旁5cm組織與和正常對(duì)照組織以及相對(duì)應(yīng)的術(shù)前、術(shù)后血清中CHFR基因和RUNX3基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化水平，探討它們?cè)谖赴┌l(fā)生發(fā)展中的作用以及與臨床資料參數(shù)之間的聯(lián)系；另外比較甲基化特異性PCR（Methylation-specific PCR，MSP）方法與結(jié)合重亞硫酸鹽限制性內(nèi)切酶法(combined bisulfite restriction analysis，COBRA)在檢測(cè)胃癌抑癌基因甲基化水平

2、上的差異性。
　　 方法：選擇經(jīng)病理確診的原發(fā)性胃癌患者，胃癌患者術(shù)前均未行放療和化療，收集胃癌根治術(shù)后腫瘤組織和配對(duì)的癌旁5cm組織各123例，正常對(duì)照組織30例，同時(shí)收集78例術(shù)前、術(shù)后血清。采用目前常用的MSP法、COBRA法檢測(cè)上述標(biāo)本中的CHFR與RUNX3基因啟動(dòng)之區(qū)甲基化的狀態(tài)。
　　 結(jié)果：
　　 1.CHFR基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的異常甲基化胃癌組織中CHFR基因甲基化陽(yáng)性率為41.5％(51/1

3、23)，癌旁組織為11.4％(14/123)，正常組織為0％(0/30)，前組與后兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 CHFR基因在分化程度為G3/G4的胃癌組織中的甲基化陽(yáng)性率顯著高于G1/G2的甲基化陽(yáng)性率，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在腫瘤直徑≥5cm的胃癌組織中的甲基化陽(yáng)性率顯著高于其在＜5cm的胃癌組織的甲基化陽(yáng)性率(P＜0.05)，而其異常甲基化在患者年齡、性別、腫瘤浸潤(rùn)深度、病理分期以及淋巴

4、結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床資料參數(shù)中的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 CHFR基因在術(shù)前血清中的甲基化陽(yáng)性率為20.5％（16/78），顯著高于術(shù)后血清中的甲基化陽(yáng)性率2.6％（2/78），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而且，外周血清中基因甲基化水平與相應(yīng)的癌組織中相同基因的甲基化水平存在一致性(P＜0.05，Kappa值為0.521)。
　　 2.RUNX3基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的異常甲基化胃癌組織中RUNX3基因

5、甲基化陽(yáng)性率為55.3％(68/123)，癌旁組織為9.8％(12/123)，而正常組織為0％(0/30)，前組與后兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 RUNX3基因在浸潤(rùn)深度為T3/T4的胃癌組織中的甲基化陽(yáng)性率顯著高于其在T1/T2的胃癌組織的甲基化陽(yáng)性率(P＜0.05)，在腫瘤直徑≥5cm的胃癌組織中的甲基化陽(yáng)性率顯著高于其在＜5cm的胃癌組織的甲基化陽(yáng)性率(P＜0.05)，而其異常甲基化在患者年齡、性別、組

6、織分化程度、病理分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床資料參數(shù)中的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 RUNX3基因在術(shù)前血清中的甲基化陽(yáng)性率為28.2％（22/78），顯著高于術(shù)后血清中的甲基化陽(yáng)性率2.6％（2/78），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而且，外周血清中基因甲基化水平與相應(yīng)的癌組織中相同基因的甲基化水平存在一致性(P＜0.05，Kappa值為0.377)。
　　 3.MSP、COBRA兩種方法在檢測(cè)胃癌組

7、織中CHFR基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化陽(yáng)性率的比較。
　　 在檢測(cè)64例胃癌組織CHFR基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化陽(yáng)性率中，MSP方法測(cè)定的甲基化陽(yáng)性率為51.6％（33/64），與COBRA方法檢測(cè)的結(jié)果42.2％（27/64）相比較，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.胃癌組織和血清中存在CHFR和RUNX3基因啟動(dòng)子區(qū)的異常甲基化，且具有一致性，參與了胃癌的發(fā)生發(fā)展，聯(lián)合檢測(cè)多個(gè)基因啟動(dòng)子區(qū)的

8、甲基化狀態(tài)可能為胃癌的診斷提供一種新的方法，有助于胃癌的臨床篩選。
　　 2.CHFR基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的異常甲基化與胃癌組織的分化程度密切相關(guān)，可作為評(píng)估胃癌組織分化程度的參考指標(biāo)。
　　 3.RUNX3基因啟動(dòng)子區(qū)的異常甲基化與胃癌的浸潤(rùn)深度密切相關(guān)，可以作為評(píng)價(jià)腫瘤浸潤(rùn)深度的檢測(cè)指標(biāo)。
　　 4.RUNX3和CHFR基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的異常甲基化與腫瘤大小顯著相關(guān)，可作為評(píng)估胃癌生長(zhǎng)的參考指標(biāo)。<