Aptamer介導載紫杉醇PEG-PLGA納米遞釋系統(tǒng)的構建及其抗腫瘤研究.pdf

1、目的:構建aptamer介導的載紫杉醇聚乳酸/乙醇酸-聚乙二醇共聚物(PEG-PLGA)納米粒靶向遞釋系統(tǒng)，研究其對實驗性鼠膠質(zhì)瘤的抗癌效果。
　　方法:通過熒光顯微鏡觀察驗證aptamer與大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞的親和性。采用碳二亞胺法合成了PLGA-PEG共聚物并進行氫核磁共振譜表征。采用乳化/溶劑揮發(fā)法制備了載紫杉醇的PLGA-PEG納米粒，以L9(34)正交試驗篩選最優(yōu)制備方法，采用碳二亞胺法將aptamer連接到納米粒表面，并

2、用聚丙烯酰胺凝膠電泳進行驗證，并對其作了粒徑、電性和體外釋放度表征。采用噻唑藍比色法測定了紫杉醇注射劑、納米粒和aptamer修飾納米粒對大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞的毒性。采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法測定紫杉醇注射劑、納米粒和aptamer修飾納米粒在大鼠體內(nèi)的藥物動力學參數(shù)。采用尾靜脈注射多劑量重復給藥，以腫瘤生長抑制實驗和生存期評價紫杉醇注射劑、納米粒和aptamer修飾納米粒的抗腫瘤作用。
　　結(jié)果:aptamer與C6的親和隨著apt

3、amer濃度的增高（0.05、0.25和1.25 pmol·μl-1）與孵育時間（5、15、30和60 min）的延長而增強。以摩爾比PLGA∶PEG=1∶1，兩步反應時間分別為4和12h合成的PLGA-PEG共聚物數(shù)均分子量約為22，800，PEG連接率為25％，產(chǎn)率44％。最優(yōu)制備方法為超聲功率180 W，時間30 Sec，投藥量2％，膽酸鈉總體積12 ml，得到的納米粒強度粒徑112nm，電位為-23.70 mV，包封率為49.6

4、％，在PH7.4磷酸鹽緩沖液和空白血漿中紫杉醇從納米粒中的釋放相似，24 h有45％的藥量突釋，之后緩慢釋放。約有70％的aptamer連接到納米粒表面，形成的aptamer修飾納米粒粒徑為156 nm，電位為-32.93 mV，在PH7.4磷酸鹽緩沖液和空白血漿中的體外釋放度與不修飾納米粒沒有顯著性差異。細胞存活率隨紫杉醇濃度的增高（0.038、0.38、0.76、3.8、12和24μg·ml-1）和孵育時間（24、48和96 h）的

5、延長而降低。24、48和96 h時aptamer修飾納米粒的半數(shù)抑制濃度IC50分別是注射劑的2.59、4.18和4.67倍，是納米粒的2.92、3.32和2.67倍。紫杉醇注射劑、納米粒和aptamer修飾納米粒在大鼠血漿中的消除半衰期t1/2β分別為1.79、5.43和4.16 h，AUC分別為918.78、5351.30和4982.11μg·L-1h-1。腫瘤生長體積aptamer修飾納米粒組＜納米粒組＜注射劑組＜生理鹽水組，20