骨髓增生異常綜合征相關(guān)基因表達(dá)研究.pdf

1、目的：研究骨髓增生異常綜合征（myelodysplastic syndromes，MDS）及急性髓細(xì)胞白血?。╝cute myelogenous leukemia，AML）患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中c-FLIPL、c-FLIPS及DLK1基因mRNA表達(dá)情況。通過(guò)丙戊酸鈉（sodium valprate，VPA）干預(yù)MDS細(xì)胞株SKM-1，觀察其對(duì)細(xì)胞增殖及凋亡的影響，并觀察上述基因在這一過(guò)程中表達(dá)變化，分析其作用機(jī)制。同時(shí)通過(guò)相關(guān)檢測(cè)加深對(duì)

2、SKM-1細(xì)胞株的認(rèn)識(shí)。
　　 方法：使用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcrition polymerase chain reaction，RT-PCR）技術(shù)檢測(cè)16例MDS患者、8例AML患者及3例正常對(duì)照者骨髓單個(gè)核細(xì)胞（bone marrowmonomuclear cell，BMMNC）中c-FLIPL、c-FLIPS及DLK1基因mRNA表達(dá)情況；采用四甲基偶氮唑藍(lán)（methyl thiazolyl te

3、trazolium，MTT）比色法檢測(cè)VPA對(duì)SKM-1細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用；流式細(xì)胞術(shù)（Flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測(cè)不同濃度VPA作用后細(xì)胞凋亡率；同時(shí)使用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)VPA作用SKM-1后c-FLIPL，c-FLIPS及DLK1等基因mRNA表達(dá)的變化；采用流式細(xì)胞術(shù)及染色體分析方法檢測(cè)SKM-1細(xì)胞株免疫表型及染色體核型。
　　 結(jié)果： DLK1、c-FLIPL mRNA在MDS及AML患者中表達(dá)明顯高

4、于對(duì)照組（P<0.05），其在MDS和AML患者之間的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；c-FLIPS mRNA在MDS患者中表達(dá)與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），但MDS-RA患者表達(dá)明顯低于MDS-RAEB及AML患者（P<0.05）；c-FLIPS mRNA在AML患者表達(dá)明顯高于對(duì)照組及MDS組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。VPA對(duì)于SKM-1細(xì)胞生長(zhǎng)具有抑制作用，且具有時(shí)間和濃度依賴性；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯

5、示，細(xì)胞凋亡率隨著VPA濃度的增加而增加；VPA可使SKM-1細(xì)胞中c-FLIPL、c-FLIPS及DLK1基因mRNA表達(dá)明顯降低，且隨著VPA濃度增加逐漸降低（P<0.05）。SKM-1細(xì)胞株免疫表型為CD1599.3％，CD1380％，CD3398.4％，CD11b21％，其余的表型如CD2，CD3，CD5，CD7，CD8，CD10，CD14，CD34，CD64，CD117，HLA-DR均陰性表達(dá)，染色體核型為70-73，XY，-

6、2，2p-，-4，6p+，7q+，+8，9q-，der（10）t（10；21），-12，-15，+18，der（19）t（1；19），-20，+21，+22，+M。
　　 結(jié)論：（1）DLK1、c-FLIPL及c-FLIPS基因在MDS、AML患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中表達(dá)存在異常；（2）VPA可以通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞凋亡抑制SKM-1細(xì)胞增殖；（3）c-FLIPL、c-FLIPS及DLK1基因表達(dá)的改變可能在VPA誘導(dǎo)SKM-1細(xì)胞凋亡中發(fā)