新生大鼠缺氧缺血性腦損傷腦組織水通道蛋白-4的表達與神經(jīng)細胞凋亡.pdf

1、目的
　　 缺氧缺血性腦損傷(HIBD)的發(fā)病機制是復雜的,隨著對HIBD發(fā)病機制的進一步認識,HIBD后遲發(fā)性神經(jīng)元死亡的發(fā)生與細胞凋亡密切相關。由于凋亡進展緩慢而且可逆,為治療HIBD提供了時間窗。腦組織水通道蛋白-4(Aquaporin-4,AQP-4)在圍產(chǎn)期新生兒窒息中的作用還不十分清楚,本研究亦在探討HIBD時AQP-4的表達及其與腦細胞凋亡的關系。
　　 方法
　　 新生7日齡Wistar大鼠30只

2、,隨機分為對照組(10只)和實驗組(20只)。實驗組根據(jù)處死時間不同又分為2個亞組:1d組、3d組,每亞組各10只。實驗組新生大鼠采用結扎左側頸總動脈后置于含8%濃度氧的低氧環(huán)境中2小時制備而成;對照組新生大鼠僅分離頸動脈,未結扎及缺氧。兩組均于造模后1d、3d留取其腦組織,采用HE染色、電鏡、免疫組織化學檢測腦組織AQP-4表達及腦細胞凋亡情況。采用SPSS16.0軟件進行分析。
　　 結果
　　 1、行為能力改變:缺

3、氧缺血后新生大鼠出現(xiàn)不同程度的行為異常,如自發(fā)左旋,逐漸失去平衡能力,部分鼠出現(xiàn)抽搐,尿、便失禁,嗜睡或昏睡狀態(tài),有的昏迷;
　　 2、HE染色和電鏡:二者結果均證實,新生大鼠HIBD時凋亡是神經(jīng)細胞主要的死亡形式,與壞死共存,且凋亡的發(fā)生先于壞死;凋亡的細胞主要位于選擇性細咆死亡區(qū)、病變較輕的丘腦和海馬CA2/CA3區(qū)域、病變較重的皮質(zhì)和紋狀體邊緣內(nèi)帶;而壞死的細胞主要位于病變較重的皮質(zhì)和紋狀體的中心。HE染色顯示缺氧缺血組大

4、鼠大腦皮質(zhì)出現(xiàn)局灶性神經(jīng)元核固縮,核碎裂,核仁偏位或消失,膠質(zhì)細胞增生,基質(zhì)疏松;電鏡可更加清晰、細致的觀察細胞凋亡的改變,明確區(qū)別正常神經(jīng)細胞,早、中、晚期凋亡細胞及壞死細胞。
　　 3、免疫組織化學染色:缺氧缺血組新生大鼠腦組織AQP-4表達較對照組明顯增加,實驗組腦細胞胞漿內(nèi)可見大量棕黃色顆粒沉著,而對照組僅在腦實質(zhì)血管周圍,星形膠質(zhì)細胞可見少量棕黃色顆粒,對照組腦組織的AQP-4的免疫組化平均OD值(0.23±0.05)

5、低于實驗組(HIBD后1d0.25±0.03;HIBD后3d0.27±0.03),差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 結論
　　 1、HE染色、免疫組化及透射電鏡均證實新生大鼠HIBD時凋亡是神經(jīng)細胞主要的死亡形式、與壞死共存,凋亡先于壞死。凋亡的細胞主要位于選擇性細胞死亡區(qū)、病變較輕的丘腦和海馬CA2/CA3區(qū)域、病變較重的皮質(zhì)和紋狀體邊緣內(nèi)帶;而壞死的細胞主要位于病變較重的皮質(zhì)和紋狀體的中心。遲發(fā)性的細胞凋亡是