STIM1、ORAI1在外傷性癲癇大鼠中的表達(dá).pdf

1、1.1研究目的:通過(guò)建立外傷性癲癇（PTE）大鼠模型，觀察鈣釋放激活鈣(CRAC)通道中的兩個(gè)關(guān)鍵蛋白基質(zhì)相互作用分子1(STIM1)和鈣釋放激活鈣通道調(diào)節(jié)分子1(ORAI1/CRACM1)在PTE大鼠皮層腦組織中的表達(dá)情況，探討這兩個(gè)蛋白是否參與PTE的形成及其可能的機(jī)制。
　　 1.2研究方法:將84只成年SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組（42只）和實(shí)驗(yàn)組（42只）。實(shí)驗(yàn)組大鼠予左側(cè)感覺(jué)運(yùn)動(dòng)皮層區(qū)域注射100mmol/L FeCl35

2、μl，建立FeCl3 PTE模型，對(duì)照組大鼠予皮層相同位置注射5μl生理鹽水作為對(duì)照。注射后通過(guò)觀察大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)以評(píng)估模型是否成功建立。在傷后6h、24h、72h、7d、14d、21d和28d共7個(gè)時(shí)間點(diǎn)，分別隨機(jī)選取實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各6只大鼠，收集傷側(cè)皮層腦組織，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)STIM1和ORAI1的mRNA表達(dá)水平，然后用Western blot和免疫組化檢測(cè)STIM1和ORAI1蛋白的表達(dá)水平。

3、>　　 1.3研究結(jié)果
　　 (1) PTE大鼠模型建立結(jié)果:對(duì)照組大鼠未見(jiàn)癲癇發(fā)作;實(shí)驗(yàn)組大鼠皮層注射FeCl3后出現(xiàn)典型的癲癇發(fā)作，制模成功率達(dá)84.0％，連續(xù)觀察28天均可見(jiàn)典型的癲癇發(fā)作。
　　 (2)RT-PCR檢測(cè)結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組傷后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的STIM1和ORAI1的mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組比較均顯著增高（P＜0.05，P值均為0.000），72h組表達(dá)為最高峰(P＜0.05，P值均為0.000)。
　

4、　 (3) Western blot檢測(cè)結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組大鼠皮層STIM1在傷后6h的蛋白表達(dá)與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05，P值為0.322)，此后6個(gè)時(shí)間點(diǎn)的蛋白表達(dá)與對(duì)照組比較均顯著增高(p＜0.05，傷后24h、72h、7d、14d、21d、28d的P值分別為0.006、0.000、0.003、0.002、0.006、0.005)，72h組表達(dá)為最高峰(P＜0.05，P值為0.000);實(shí)驗(yàn)組ORAI1的蛋白表達(dá)趨勢(shì)與ST

5、IM1類(lèi)似，在傷后6h的蛋白表達(dá)與對(duì)照組比較無(wú)明顯變化(P＞0.05，P值為0.054)，此后6個(gè)時(shí)間點(diǎn)的蛋白表達(dá)與對(duì)照組比較均顯著增高（P＜0.05，傷后24h、72h、7d、14d、21d、28d的P值分別為0.001、0.000、0.000、0.001、0.002、0.003），72h組表達(dá)為最高峰（P＜0.05，P值為0.000）。
　　 (4)免疫組化檢測(cè)結(jié)果:傷后72h，STIM1在對(duì)照組傷灶周邊皮層神經(jīng)元中僅有弱陽(yáng)

6、性表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組STIM1在細(xì)胞膜表面的陽(yáng)性表達(dá)量與對(duì)照組比較顯著增加（t=16.233，P＜0.05）;傷后72h，ORAI1在對(duì)照組傷灶周邊皮層神經(jīng)元有弱陽(yáng)性表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組ORAI1在細(xì)胞膜表面的陽(yáng)性表達(dá)量與對(duì)照組比較顯著增加（t=17.339，P＜0.05）。
　　 1.4研究結(jié)論:STIM1、ORAI1在PTE大鼠皮層腦組織中表達(dá)顯著上調(diào)，提示CRAC通道與PTE的形成關(guān)系密切，可能參與了PTE的形成，并可能成為潛在的抗癲癇