血管緊張素-(1-7)對(duì)醛固酮激活腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:觀察血管緊張素-(1-7)[Ang-(1-7)]對(duì)醛固酮(ALD)激活大鼠腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞(NRK-49F)及細(xì)胞外基質(zhì)分泌的影響,并初步探討其機(jī)制。方法:體外傳代培養(yǎng)NRK-49F細(xì)胞,按1×105/ml濃度接種于六孔板中,按以下實(shí)驗(yàn)分組加入不同干預(yù)因素:(1)對(duì)照組:僅加入含體積分?jǐn)?shù)10％胎牛血清的DMEM-F12培養(yǎng)基,即正常培養(yǎng)基;(2)ALD組:正常細(xì)胞培養(yǎng)基中加入的ALD刺激液,調(diào)整其終濃度為10-7mol/L;(3)

2、Ang-(1-7)組:正常細(xì)胞培養(yǎng)基中加入的Ang-(1-7)刺激液,調(diào)整其終濃度為10-6mol/L;(4)ALD+Ang-(1-7)組:正常細(xì)胞培養(yǎng)基中加入Ang-(1-7)+ALD混合刺激液,調(diào)整其終濃度分別為10-6mol/L和10-7mol/L。按上述實(shí)驗(yàn)分組進(jìn)行如下檢測(cè):(1)干預(yù)細(xì)胞48h后,運(yùn)用細(xì)胞免疫化學(xué)染色法檢測(cè)細(xì)胞激活標(biāo)志物α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)表達(dá);(2)干預(yù)細(xì)胞48h后,運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附方法(ELIS

3、A)檢測(cè)各組細(xì)胞上清液中Ⅰ型膠原(ColⅠ)的含量;按上述實(shí)驗(yàn)分組干預(yù)細(xì)胞30min后,提取細(xì)胞總蛋白,運(yùn)用蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)各組細(xì)胞中磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(pERK1/2)的表達(dá)。結(jié)果:(1)細(xì)胞免疫化學(xué)染色檢測(cè)結(jié)果:干預(yù)48h后:對(duì)照組組細(xì)胞仍呈長(zhǎng)梭型,胞漿內(nèi)僅見(jiàn)少量棕黃色顆粒,Ang-(1-7)組與之類似;而ALD組細(xì)胞胞漿比例增大,細(xì)胞肥大,部分細(xì)胞呈多角狀,胞漿內(nèi)染色明顯,呈顆粒狀,分界清楚。半

4、定量分析顯示對(duì)照組細(xì)胞及Ang-(1-7)組細(xì)胞只有基礎(chǔ)量的α-SMA表達(dá),與對(duì)照組細(xì)胞相比較,Ang-(1-7)組細(xì)胞α-SMA的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),而ALD組細(xì)胞及ALD+Ang-(1-7)組細(xì)胞α-SMA的表達(dá)顯著升高(P<0.05);與 ALD組細(xì)胞相比較, ALD+Ang-(1-7)組細(xì)胞α-SMA的表達(dá)明顯減少(P<0.05)。(2)ELISA檢測(cè)結(jié)果:干預(yù)48h后:ALD組細(xì)胞及ALD+Ang-(1-7)

5、組細(xì)胞上清液中ColⅠ含量較對(duì)照組顯著升高(P<0.05),而Ang-(1-7)組細(xì)胞上清液中ColⅠ含量與對(duì)照組相比較沒(méi)有明顯變化(P>0.05);與 ALD組細(xì)胞相比較, ALD+Ang-(1-7)組細(xì)胞上清液中ColⅠ含量明顯減少(P<0.05)。(3)Western blot檢測(cè)結(jié)果:干預(yù)細(xì)胞30min后:與對(duì)照組細(xì)胞相比較,ALD組細(xì)胞pERK1/2的表達(dá)顯著升高(P<0.05),Ang-(1-7)組細(xì)胞pERK1/2表達(dá)差異