苦參堿對腎移植大鼠靜脈血IL-6及IFN-γ表達的影響.pdf

1、目的：通過在近交系大鼠SD及Wistar之間建立的同種異體腎移植急性排斥反應模型上進行實驗，檢測腎移植受體大鼠靜脈血中細胞因子IL-6及IFN-γ表達水平的變化，研究苦參堿(Matrine，Mat)對大鼠腎移植急性排斥反應的抑制作用及效應，進一步探討苦參堿免疫抑制作用的分子生物學機制，以及苦參堿與環(huán)孢菌素A(CyclosprinA，CsA)是否存在協(xié)同效應，以期苦參堿的使用能減少CsA的用量，減輕其毒副作用，為器官移植的免疫抑制劑用藥可

2、能提供一種新穎、安全的方案，為今后器官移植免疫抑制劑的開發(fā)利用打下堅實的基礎。　　方法：用近交系SD大鼠作為腎移植供體，近交系Wistar大鼠為腎移植受體，分為7組。用改良腎移植術建立同種異基因/同基因原位腎移植急性排斥反應實驗動物模型，術后按施加的處理因素不同將腎移植急性排斥反應動物模型分為Ⅰ～Ⅳ組，每組12只：Ⅰ組(生理鹽水組，N.S組，N.S1ml.kg-1.d-1，ip)；Ⅱ組(Mat組，Mat10mg.kg-1.d-1，ip

3、)；Ⅲ組(CsA組，CsA2.5mg.kg-1.d-1，ip)；Ⅳ組(Mat+CsA組，Mat10mg.kg-1.d-1+CsA2.5mg.kg-1.d-1，ip)。對照組Ⅴ～Ⅶ組：Ⅴ組(同基因移植組)，為Ⅰ～Ⅳ組同種異基因腎移植手術對照組，建立近交系Wistar→Wistar同基因腎移植模型12只，術后予N.S腹腔注射；Ⅵ組(手術對照組)，為Ⅰ～Ⅴ組腎移植手術對照組，為腎移植假手術組，近交系Wistar大鼠12只，術后予N.S腹腔注射

4、；Ⅶ組(正常對照組)，為Ⅰ～Ⅵ組手術對照組，近交系Wistar大鼠12只，每天予N.S腹腔注射，正常飼養(yǎng)。從每組中隨機抽取6只，觀察受體鼠的存活時間，每日尿量及泌尿持續(xù)時間。另6只于術后7天處死，取下腔靜脈血檢測血肌酐(Scr)及血尿素氮(Bun)水平，應用ELISA法檢測靜脈血IL-6及IFN-γ表達水平，完整留取移植腎行病理切片觀察病理改變。用ANOVA和Dunnett'sT3方差分析方法分析Mat、CsA、Mat+CsA對腎移植大

5、鼠存活時間、泌尿持續(xù)時間、腎功能指標的影響，以及對靜脈血IL-6及IFN-γ表達水平變化的影響?！　〗Y果：3個對照組大鼠均長期存活，超過100天，生理鹽水組受體大鼠在術后8天內死亡，平均存活6.83±0.75天，Mat組受體大鼠平均存活10.16±1.17天，延長了受體鼠的存活時間，CsA組受體大鼠平均存活11.50±1.05天，Mat與CsA聯(lián)合應用后，可明顯延長受體鼠的存活時間至17天以上(20.33±2.58天)，Mat組與生理

6、鹽水組相比較，存在顯著差異(P=0.000＜0.05)；Mat組與CsA組相比較無明顯差異(P=0.558＞0.05)；Mat+CsA組與Mat組及CsA組相比較均存在顯著差異(P=0.000＜0.05)。各組與生理鹽水組相比較均增加了尿量，延長了泌尿持續(xù)時間，腎功能指標Scr、Bun的水平(術后第7天取下腔靜脈血)正常對照組水平最低(Scr=46.31±5.65umol/L，Bun=4.21±0.21mmol/L)，生理鹽水組Scr、

7、Bun均明顯高于其他各組，且存在顯著差異(P=0.000＜0.05)；Mat組及CsA組與Mat+CsA組間的差異有顯著性(P=0.000＜0.05)?！　∫浦材I組織病理形態(tài)學表現(xiàn)為：正常對照組及假手術組形態(tài)結構正常；同基因移植組表現(xiàn)為臨界級，少量的間質細胞浸潤，輕度腎小管炎；CsA組為ⅠA/ⅠB級，表現(xiàn)為混合性排斥反應樣改變，有間質細胞浸潤伴局灶性的輕-中度腎小管炎；Mat組為ⅡA/ⅡB級，亦表現(xiàn)為混合性排斥反應樣改變，但間質細胞浸

8、潤明顯伴輕-中度、重度動脈內膜炎；Mat+CsA組為ⅠA級，間質細胞浸潤明顯減少伴局灶性的輕度腎小管炎；N.S組排斥反應最為嚴重，為Ⅲ級，腎內血管嚴重損害，出現(xiàn)透壁壞死性動脈內膜性炎或纖維蛋白樣改變伴中層平滑肌壞死。各組移植腎Banff'97急性排斥反應不同的分級評分：N.S組為6.00±0.00，Mat組為4.33±0.52，CsA組為2.67±0.52，Mat+CsA組為2.17±0.41，同基因移植組為1.00±0.00，差異有顯

9、著性意義(P=0.000＜0.05)，Mat+CsA在改善移植腎急性排斥反應病理組織形態(tài)學方面上存在交互效應?！　§o脈血中IL-6及IFN-γ的表達水平在3個對照組中很低，生理鹽水組的表達水平最高，與其他3個實驗組相比較存在顯著差異(P=0.000＜0.05)，Mat組與CsA組比較無明顯差異(P＞0.05)，Mat+CsA組與Mat組及CsA組相比較均存在顯著差異(P=0.000＜0.05)，從而得出苦參堿有一定的免疫抑制作用，且其

10、與CsA在減輕急性排斥反應所致組織學改變上及免疫抑制作用上存在協(xié)同效應?！　〗Y論：苦參堿對大鼠同種異基因腎移植的急性排斥反應起到一定的免疫抑制作用：能夠增加受體鼠的尿量，延長泌尿持續(xù)時間及存活天數(shù)，減輕急性排斥反應對移植腎功能的損害；改善移植腎急性斥反應病理組織形態(tài)學變化；可能通過下調IL-6、IFN-γ的表達水平而產生免疫抑制作用。并與免疫抑制作用已肯定的CsA存在協(xié)同效應：苦參堿與CsA聯(lián)用可減少CsA的用量，從而減輕或一定程度上