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1、目的:冠心病在發(fā)達國家的發(fā)病率和死亡率都居于第一位,通常認為心肌細胞在出生后即不能再生,心肌細胞死亡后大量的心肌細胞由疤痕組織替代,導致局部的心肌收縮紊亂,心功能下降,最后導致充血性心衰。本試驗針對心衰的基本病理生理,通過BMP-2誘導后的骨髓間充質(zhì)干細胞移植入受損的心肌內(nèi),改善心室重構(gòu),促進梗死區(qū)血管新生來增加干細胞修復受損心肌的治療效果,并進一步探討干細胞治療缺血性心肌病的機理。 方法:從健康梅山豬骨髓中分離培養(yǎng)BMSCs,
2、取第四代骨髓間充質(zhì)干細胞,用BMP-2誘導24小時,促進其向心肌細胞定向分化,免疫細胞化學檢測誘導后不同時間點的心肌特異性蛋白cTnT和CX-43及MHC的表達。 健康雄性梅山豬15只隨機分為3組,經(jīng)心導管用明膠海綿栓塞LAD第二對角支建立心梗模型,A組(對照組):梗死四周后通過介入方法在心梗區(qū)移植5mlDMEM;B組(干細胞組):梗死四周后在心梗區(qū)移植1×107個BMSCs;C組(誘導組):梗死四周后在心梗區(qū)移植1×107個經(jīng)
3、BMP-2誘導分化后的BMSCs。 檢測心梗前后及移植后心功能的變化,VII因子免疫組化染色計數(shù)新生毛細血管數(shù)量,Westernblot檢測各組梗死區(qū)GATA-4蛋白表達,ECT檢測心肌缺血狀況,大體標本TTC法檢查各組心梗面積的變化。 結(jié)果:利用Ficoll分離和貼壁培養(yǎng)的方法可以獲取穩(wěn)定分裂的梅山豬骨髓間充質(zhì)干細胞。用BMP-2誘導后,MCSs的形態(tài)和排列發(fā)生變化。免疫細胞化學染色顯示,cTnT和CX-43從誘導后3
4、周開始表達,4周cTnT表達增強,呈現(xiàn)密集的橫紋樣結(jié)構(gòu);CX-43在3周位于細胞膜下,4周呈顆粒狀密集分布于肌管的相鄰細胞連接處;三周后可見MHC陽性棕黃顆粒表達于胞漿及胞核中。移植前,血流動力學LVDP、±dp/dtmax下降明顯(與心梗前比較,P<0.05),移植后,隨著時間的延長,B、C組的心功能較移植前有明顯改善(P<0.05),而C組的改善更為明顯(與B組比較,P<0.05);與A、B兩組,C組的心梗面積縮小,新生毛細血管數(shù)量
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