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文檔簡(jiǎn)介
1、毛首鞭形線蟲簡(jiǎn)稱鞭蟲,屬于無尾感器綱鞭尾目鞭蟲科鞭蟲屬,為人體和動(dòng)物腸道常見的寄生線蟲。據(jù)資料記載,豬鞭蟲還可感染人體。隨著生物種群的不斷進(jìn)化和發(fā)展,尤其對(duì)那些相似種或近緣種,寄生蟲的形態(tài)學(xué)鑒定越來越顯出它的局限性。尤其是近幾年,PCR技術(shù)在寄生蟲的分子分類學(xué)、分子遺傳學(xué)、種(株)鑒定等方面的研究已取得了很大的成功,如以PCR擴(kuò)增反應(yīng)為基礎(chǔ)的限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)及單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SS
2、CP)分析等。 本研究首次對(duì)來源于中國不同地方不同宿主鞭蟲的間隔區(qū)序列(internal transcribed spacer,ITS)以及線粒體(mtDNA)基因大亞基(1srRNA)、NADH脫氫酶亞單位Ⅳ基因(nad4)進(jìn)行PCR擴(kuò)增、克隆及序列分析。結(jié)果,豬鞭蟲ITS-1序列長(zhǎng)為655-661bp,ITS-2序列長(zhǎng)為530-538 bp;人鞭蟲ITS-1序列長(zhǎng)為600-627bp,ITS-2序列長(zhǎng)為468-486 bp;
3、二者的5.8S序列長(zhǎng)均為154bp。其中,豬鞭蟲與西班牙豬鞭蟲ITS-1序列的差異堿基有14個(gè),差異率為2.1%;ITS-2序列的差異堿基有18個(gè),差異率為3.4%;5.8S序列的種(株)內(nèi)差異堿基有1個(gè),差異率為0.6%。人鞭蟲ITS-1序列的種(株)內(nèi)差異堿基有34個(gè),差異率為5.4%:ITS-2序列的種(株)內(nèi)差異堿基有30個(gè),差異率為6.4%。豬鞭蟲ITS-1序列的種(株)內(nèi)差異堿基有15個(gè),差異率為2.3%;ITS-2序列的種
4、(株)內(nèi)差異堿基有13個(gè),差異率為2.4%。人鞭蟲與豬鞭蟲ITS-1序列的堿基差異率達(dá)45.1%,ITS-2序列的堿基差異率達(dá)74.7%,5.8S序列的差異堿基有6個(gè)差異率達(dá)3.9%。在豬鞭蟲可見微衛(wèi)星重復(fù)序列(ITS-1:AGC,CGC;ITS-2:GCT,CG,C),人鞭蟲(ITS-1:CAG,GGC;ITS-2:CAG,CGA,CGG,GCG)。剔除ITS-1、ITS-2序列中的微衛(wèi)星重復(fù)序列后,人鞭蟲ITS-1序列的種(株)內(nèi)差
5、異堿基有10個(gè),差異率為1.7%;ITS-2序列的種(株)內(nèi)差異堿基有5個(gè),差異率為1.1%。豬鞭蟲ITS-1序列的種(株)內(nèi)差異堿基有9個(gè),差異率為1.4%;ITS-2序列的種(株)內(nèi)差異堿基有9個(gè),差異率為1.8%。從GeneBank數(shù)據(jù)庫下載Trichinella spiralis的ITS-2基因片段作為外群(accession number:AY851266),相關(guān)鞭蟲的ITS-2基因片段(Trichuris.ovis,AJ23
6、8220;T. leporis,AJ251321;T.skrjabini,AJ489248;T. vulpis,AM234616;T. arvicolae,AJ310661;T. muris,AJ299407),采用PHYLIP(version3.67)的距離法(鄰接法)以及PAUP(version 4.0b4a)的最大簡(jiǎn)約法,一齊進(jìn)行進(jìn)化樹分析。結(jié)果顯示,rDNA的ITS-1序列的PCR-RFLP差異性分析以及ITS-2序列作為分子遺
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