人、豬鞭蟲核糖體DNA及線粒體DNA遺傳多樣性的研究.pdf

1、毛首鞭形線蟲簡(jiǎn)稱鞭蟲，屬于無尾感器綱鞭尾目鞭蟲科鞭蟲屬，為人體和動(dòng)物腸道常見的寄生線蟲。據(jù)資料記載，豬鞭蟲還可感染人體。隨著生物種群的不斷進(jìn)化和發(fā)展，尤其對(duì)那些相似種或近緣種，寄生蟲的形態(tài)學(xué)鑒定越來越顯出它的局限性。尤其是近幾年，PCR技術(shù)在寄生蟲的分子分類學(xué)、分子遺傳學(xué)、種(株)鑒定等方面的研究已取得了很大的成功，如以PCR擴(kuò)增反應(yīng)為基礎(chǔ)的限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)及單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SS

2、CP)分析等。 本研究首次對(duì)來源于中國不同地方不同宿主鞭蟲的間隔區(qū)序列(internal transcribed spacer,ITS)以及線粒體(mtDNA)基因大亞基(1srRNA)、NADH脫氫酶亞單位Ⅳ基因(nad4)進(jìn)行PCR擴(kuò)增、克隆及序列分析。結(jié)果，豬鞭蟲ITS-1序列長(zhǎng)為655-661bp，ITS-2序列長(zhǎng)為530-538 bp；人鞭蟲ITS-1序列長(zhǎng)為600-627bp，ITS-2序列長(zhǎng)為468-486 bp；

3、二者的5.8S序列長(zhǎng)均為154bp。其中，豬鞭蟲與西班牙豬鞭蟲ITS-1序列的差異堿基有14個(gè)，差異率為2.1％；ITS-2序列的差異堿基有18個(gè)，差異率為3.4％；5.8S序列的種(株)內(nèi)差異堿基有1個(gè)，差異率為0.6％。人鞭蟲ITS-1序列的種(株)內(nèi)差異堿基有34個(gè)，差異率為5.4％：ITS-2序列的種(株)內(nèi)差異堿基有30個(gè)，差異率為6.4％。豬鞭蟲ITS-1序列的種(株)內(nèi)差異堿基有15個(gè)，差異率為2.3％；ITS-2序列的種

4、(株)內(nèi)差異堿基有13個(gè)，差異率為2.4％。人鞭蟲與豬鞭蟲ITS-1序列的堿基差異率達(dá)45.1％，ITS-2序列的堿基差異率達(dá)74.7％，5.8S序列的差異堿基有6個(gè)差異率達(dá)3.9％。在豬鞭蟲可見微衛(wèi)星重復(fù)序列(ITS-1：AGC，CGC；ITS-2：GCT，CG，C)，人鞭蟲(ITS-1：CAG，GGC；ITS-2：CAG，CGA，CGG，GCG)。剔除ITS-1、ITS-2序列中的微衛(wèi)星重復(fù)序列后，人鞭蟲ITS-1序列的種(株)內(nèi)差

5、異堿基有10個(gè)，差異率為1.7％；ITS-2序列的種(株)內(nèi)差異堿基有5個(gè)，差異率為1.1％。豬鞭蟲ITS-1序列的種(株)內(nèi)差異堿基有9個(gè)，差異率為1.4％；ITS-2序列的種(株)內(nèi)差異堿基有9個(gè)，差異率為1.8％。從GeneBank數(shù)據(jù)庫下載Trichinella spiralis的ITS-2基因片段作為外群(accession number：AY851266)，相關(guān)鞭蟲的ITS-2基因片段(Trichuris.ovis，AJ23

6、8220；T. leporis，AJ251321；T.skrjabini,AJ489248；T. vulpis，AM234616；T. arvicolae，AJ310661；T. muris，AJ299407)，采用PHYLIP(version3.67)的距離法(鄰接法)以及PAUP(version 4.0b4a)的最大簡(jiǎn)約法，一齊進(jìn)行進(jìn)化樹分析。結(jié)果顯示，rDNA的ITS-1序列的PCR-RFLP差異性分析以及ITS-2序列作為分子遺