ECMO延遲復(fù)蘇兔失血性休克顯著減輕肺損傷.pdf

1、研究背景和目的:失血性休克是一種臨床常見疾病,大多由創(chuàng)傷引起,是目前的主要死亡原因之一。休克的臨床治療主要是采用晶體和全血的方式進行復(fù)蘇。但是當(dāng)遇到客觀條件(如:交通傷、汶川地震、戰(zhàn)爭等)限制時,由于不能及時復(fù)蘇,很多失血性休克的患者并發(fā)嚴重的肺損傷,甚至呼吸衰竭或者多器官功能衰竭。并且隨著休克持續(xù)時間的延長,傳統(tǒng)的全血+晶體的液體復(fù)蘇方式對肺的保護效果差,甚至還會加重急性肺損傷,增加休克患者的死亡率。因此對失血性休克長時間延遲復(fù)蘇肺保

2、護的研究仍是休克研究的熱點和難點。
　　目前有很多關(guān)于失血性休克炎癥反應(yīng)、復(fù)蘇方式、器官保護等方面的研究,但是他們的研究對象大多局限于休克持續(xù)時間較短(30-90分鐘)的動物模型上。而在現(xiàn)實中有很多失血性休克患者休克持續(xù)時間超過90分鐘,甚至長達3小時以上。在戰(zhàn)時因轉(zhuǎn)運不便,這一休克持續(xù)時間還會更長。這類患者復(fù)蘇成功率低,并且很容易并發(fā)嚴重的急性肺損傷,甚至發(fā)生呼吸衰竭。而目前臨床采用的呼吸機支持的肺通氣方式不僅院外使用不便,而且

3、還可能會損傷氣道,甚至加重肺損傷。
　　近年來ECMO技術(shù)作為一種新的有效的生命支持手段,在心肺衰竭等危急重癥領(lǐng)域的應(yīng)用中取得了一定的成績。隨著ECMO制作工藝的改進,ECMO使用過程中對凝血功能影響越來越小,甚至有學(xué)者提出在復(fù)雜生理條件下ECMO對出血患者的使用不是絕對禁忌。這極大地拓展ECMO在創(chuàng)傷患者的應(yīng)用前景。
　　因此,本研究采用兔股動脈放血的方式建立失血性休克延遲3小時復(fù)蘇的動物模型。并在傳統(tǒng)晶體+全血的液體復(fù)蘇

4、的基礎(chǔ)上引入ECMO技術(shù)對失血性休克持續(xù)3小時的兔進行復(fù)蘇,并且進一步探討ECMO減輕失血性休克延遲復(fù)蘇兔肺損傷的作用。
　　方法:
　　1.采用股動脈放血至平均動脈壓40mmHg,并維持平均動脈壓(35-40) mmHg3小時建立失血性休克延遲復(fù)蘇的模型。然后把失血性休克延遲復(fù)蘇的實驗兔隨機分為休克未復(fù)蘇組、液體復(fù)蘇組和ECMO復(fù)蘇組,每組8只,休克未復(fù)蘇組不進行復(fù)蘇處理,液體復(fù)蘇組采用晶體+全血進行復(fù)蘇,ECMO復(fù)蘇組在

5、晶體+全血復(fù)蘇的基礎(chǔ)上聯(lián)合ECMO進行復(fù)蘇。復(fù)蘇2小時后觀察各組的血流動力學(xué)恢復(fù)情況。待動物安樂死后留取標(biāo)本進行下一步檢測;
　　2.檢測休克前、休克畢、復(fù)蘇畢動脈血氣,比較各組氧分壓的變化;
　　3.行肺泡灌洗并對灌洗液進行離心,取上清液進行考馬斯亮藍檢測蛋白滲出量,比較各組肺通透性改變;
　　4.采用HE染色觀察各組肺組織病理改變;
　　5.采用電鏡掃描觀察各組肺組織II型肺泡上皮細胞的超微結(jié)構(gòu)變化;

6、　　6.采用ELISA法檢測各組肺組織髓過氧化物酶(MPO)改變;
　　7.采用TUNEL(原位缺口末端標(biāo)記法)檢測各組肺組織細胞凋亡的改變;
　　8.采用Western blot法檢測半胱氨酸蛋白酶3的表達情況;
　　9.統(tǒng)計分析:采用SPSS17.0軟件進行分析,所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示。
　　結(jié)果:
　　1.成功建立了兔失血性休克延遲3小時復(fù)蘇的模型。
　　2.從復(fù)蘇畢血流動力學(xué)指標(biāo)來

7、看:ECMO復(fù)蘇組復(fù)蘇2小時后的平均動脈壓較液體復(fù)蘇組和休克未復(fù)蘇組明顯回升(p<0.05,p<0.01)。
　　3.從動脈血氧分壓來看:ECMO復(fù)蘇組能夠明顯提高動脈血氧分壓(p<0.05)。
　　4.從復(fù)蘇畢各組肺組織HE染色后光鏡下的觀察來看:ECMO復(fù)蘇組復(fù)蘇2小時后肺組織的病理損傷較液體復(fù)蘇組和休克未復(fù)蘇組明顯減輕。
　　5.電鏡下觀察發(fā)現(xiàn):ECMO復(fù)蘇組復(fù)蘇2小時后 II型肺泡上皮細胞的損傷較液體復(fù)蘇組和休

8、克未復(fù)蘇組明顯減輕,板層小體清晰。
　　6.采用ELISA檢測各組肺組織髓過氧化酶發(fā)現(xiàn):ECMO復(fù)蘇組復(fù)蘇2小時后肺組織MPO的表達較液體復(fù)蘇組和休克未復(fù)蘇組明顯減少(p<0.05)。
　　7.復(fù)蘇畢考馬斯亮藍檢測各組肺灌洗液蛋白濃度發(fā)現(xiàn):ECMO復(fù)蘇組復(fù)蘇2小時后肺泡灌液的蛋白含量較液體復(fù)蘇組和休克未復(fù)蘇組明顯減少(p<0.05)。
　　8. TUNEL(原位缺口末端標(biāo)記法)法檢測各組肺組織細胞凋亡發(fā)現(xiàn):ECMO復(fù)蘇

9、組復(fù)蘇2小時后肺組織細胞凋亡較液體復(fù)蘇組和休克未復(fù)蘇組明顯減輕。
　　9.半胱氨酸蛋白酶3Western blot檢測發(fā)現(xiàn):ECMO組半胱氨酸蛋白酶3的表達較休克未復(fù)蘇組和液體復(fù)蘇組明顯降低。
　　結(jié)論:
　　1.成功建立了兔失血性休克延遲3小時復(fù)蘇的動物模型。
　　2. ECMO聯(lián)合晶體+全血復(fù)蘇的方法有利于兔失血性休克延遲復(fù)蘇的血流動力學(xué)的恢復(fù)和維持。
　　3. ECMO聯(lián)合晶體+全血復(fù)蘇的方法可以明顯