EMT過程中microRNAs與靶基因CDH1相互作用實驗研究.pdf

1、癌癥患者死亡的最主要原因是由于腫瘤細胞的轉移并引起并發(fā)癥。腫瘤細胞轉移涉及細胞由上皮細胞轉變成間質細胞過程(epithelial-mesenchymal transition，EMT)，CDH1基因編碼的E-鈣粘蛋白在EMT中起關鍵的作用，且在上皮細胞中高表達。E-鈣粘蛋白的下調或者缺失會降低細胞粘附的強度，導致細胞活動性的增加，從而導致癌細胞穿過基底膜入侵周圍的組織。
　　對腫瘤細胞中microRNAs(miRNAs)與靶基因C

2、DH1相互作用研究，有助于人們了解相關疾病的發(fā)生過程，可以為臨床醫(yī)學提供一些治療方向和途徑。本文主要針對腫瘤HeLa細胞中EMT過程，開展了靶基因CDH1與miRNAs之間的相互作用機制研究，主要有以下三方面的工作和成果:
　　(1)利用預測軟件Targetscan，miRanda和PicTar，本文篩選出有可能調控靶基因CDH1的miRNAs。從中確定mir-23b，mir-92a，mir-340三個miRNAs作為具體的研究對

3、象，同時作為本實驗的對照，選取了有實驗文獻報道的mir-9作為參考。
　　(2)利用分子生物實驗的方法，首先，構建出mir-9，mir-23b，mir-92a和CDH1質粒，并轉染到HeLa細胞（人類的腫瘤細胞）和293T細胞（人類正常上皮細胞）。其次，通過雙熒光素酶檢測實驗，從RNA分子相互作用水平上，定量地測量了所選miRNAs對靶基因CDH1的作用;通過細胞劃痕實驗，從細胞水平上，研究了miRNAs對腫瘤細胞轉移能力的影響。