Ezrin介導(dǎo)NGX6a蛋白降解促進了鼻咽癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移的分子機制研究.pdf

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文Ezrin介導(dǎo)NGX6a蛋白降解促進了鼻咽癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移的分子機制研究姓名：王理申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：李桂源20090901王理博士學(xué)位論文 摘要N G X 6 高表達使5 ．8 F 細胞體外侵襲能力減弱，細胞黏附率增加，恢復(fù)間隙連接細胞間通訊；成功建立了s c i d 鼠體內(nèi)自發(fā)轉(zhuǎn)移模型，N G X 6高表達能明顯抑制鼻咽癌5 —8 F 細胞在s c i d 鼠體內(nèi)的成瘤和肺轉(zhuǎn)移灶形成

2、。E G F 和C Y T O 結(jié)構(gòu)域是N G X 6 調(diào)節(jié)細胞黏附的重要功能域，缺失該區(qū)域的突變體細胞黏附能力較N G X 6 轉(zhuǎn)染組降低：C Y T O 是調(diào)節(jié)細胞運動，遷移，細胞生長增殖的關(guān)鍵功能域。E G F 能誘導(dǎo)鼻咽癌5 ．8 F 細胞發(fā)生運動和遷移，并發(fā)生一系列的分子水平事件如E G F R ，P 1 3 K ，R h o A 表達上調(diào)，R h o A 由胞漿向胞膜移位，侵襲能力增強，細胞通訊能力減弱。N G X 6 能部

3、分抑制E G F 誘導(dǎo)的鼻咽癌5 —8 F 細胞發(fā)生運動和遷移，侵襲能力減弱，而且使E G F R ，P 1 3 K ，R h o A 表達維持誘導(dǎo)前水平，R h o A 由胞漿向胞膜移位減少，細胞通訊能力增強。綜上所述，N G X 6 的生物信息學(xué)特征和初步研究結(jié)果提示N G X 6基因可能在鼻咽癌的侵襲與轉(zhuǎn)移中發(fā)揮抑制性的作用。t r 呵c x 6 蛋白存在兩個蛋白亞型：N G X 6 a 亞型在鼻咽癌中表達下調(diào)】抗體是基因功能研究

4、重要的工具。為了制備N G X 6 多克隆抗體，采用p E T 原核表達系統(tǒng)表達并純化N G X 6 A T M 2 蛋白( 第二跨膜區(qū)缺失) 。將重組蛋白免疫新西蘭兔，制備獲得抗N G X 6 蛋白多克隆抗體。該抗體特異性好，效價高，可應(yīng)用于W e s t e r nb l o t ( 1 ：3 0 0 0 ) 、免疫組化( 1 ：1 0 0 0 ) 以及免疫熒光( 1 ：5 0 0 ) 檢測。應(yīng)用該抗體研究以及數(shù)據(jù)庫比對發(fā)現(xiàn)，N G