雜質(zhì)譜分析中復(fù)雜樣品HPLC分析體系評(píng)價(jià)策略的探討.pdf

1、對(duì)藥品中雜質(zhì)的控制是保障人民用藥安全的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。近年來(lái),“雜質(zhì)譜控制”的理念逐漸成熟,強(qiáng)調(diào)對(duì)藥品中的每一個(gè)雜質(zhì)依據(jù)其特性分別進(jìn)行合理的控制。復(fù)雜體系樣品的分離分析作為雜質(zhì)譜控制的第一環(huán)節(jié)尤為重要。有關(guān)物質(zhì)控制是藥品雜質(zhì)譜控制的主要內(nèi)容。縱觀各國(guó)藥典,利用反相液相色譜系統(tǒng)分析有關(guān)物質(zhì)已成為藥品質(zhì)量控制的主流。在對(duì)復(fù)雜樣品有關(guān)物質(zhì)HPLC方法的開發(fā)和評(píng)價(jià)中,如何主動(dòng)認(rèn)知分析對(duì)象的雜質(zhì)譜、明確影響雜質(zhì)分離的關(guān)鍵因素、確定每一個(gè)雜質(zhì)的峰位,一直

2、是藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)、企業(yè)、科研人員關(guān)注的熱點(diǎn)。
　　本文根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)分析中的“拉姆斯菲爾德四象限(Rumsfeld Quadrants)”理論,提出了基于風(fēng)險(xiǎn)分析的HPLC分析體系的“四象限”評(píng)價(jià)策略。通過(guò)回答兩個(gè)問題:(1)雜質(zhì)已知還是未知;(2)雜質(zhì)是否被分析方法檢出,將雜質(zhì)分析結(jié)果分為四象限考慮。四個(gè)象限具有不同的意義:第一象限代表被檢出的已知雜質(zhì),第二象限代表被檢出的未知雜質(zhì),第三象限代表未檢出的未知雜質(zhì),第四象限代表未檢出的已知

3、雜質(zhì)。第一象限表征方法對(duì)已知雜質(zhì)的檢測(cè)能力,理想的HPLC方法應(yīng)使得所有的已知雜質(zhì)都出現(xiàn)在第一象限;如果已知雜質(zhì)未在HPLC色譜系統(tǒng)中檢出,就構(gòu)成了第四象限,其反映分離方法自身的缺陷;第二象限表征方法對(duì)未知雜質(zhì)的檢出能力,理想的分析方法應(yīng)能及時(shí)發(fā)現(xiàn)樣品中新出現(xiàn)的各類雜質(zhì);如果新出現(xiàn)的雜質(zhì)(雜質(zhì)未知)未能被方法檢出,就是第三象限表征的情況。
　　“四象限”評(píng)價(jià)策略包括以下五部分工作:第一,主動(dòng)認(rèn)知分離對(duì)象,即雜質(zhì)譜。我們通過(guò)對(duì)抗生素

4、的生物合成途徑、生產(chǎn)工藝和降解反應(yīng)機(jī)理的總結(jié),認(rèn)知其雜質(zhì)譜的復(fù)雜性。第二,優(yōu)化HPLC分析方法,提高方法對(duì)復(fù)雜樣品中雜質(zhì)的檢出能力,即擴(kuò)大第一、二象限范圍,降低第三象限風(fēng)險(xiǎn)。我們?cè)诔浞痔接懮V分離過(guò)程中的關(guān)鍵影響因素的基礎(chǔ)上,采用實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(Design of Experiment, DOE)的方法優(yōu)化色譜分析方法。第三,識(shí)別已知雜質(zhì),推測(cè)未知雜質(zhì),即確定第一象限的雜質(zhì),并推測(cè)第二象限雜質(zhì)的結(jié)構(gòu),我們采用柱切換LC-MS技術(shù),結(jié)合對(duì)已知雜

5、質(zhì)MS裂解規(guī)律的認(rèn)識(shí)鑒別色譜峰。第四,預(yù)測(cè)樣品中未出現(xiàn)的已知雜質(zhì)即第四象限雜質(zhì)在色譜系統(tǒng)中的保留值。我們通過(guò)探討雜質(zhì)譜的定量結(jié)構(gòu)-保留關(guān)系(QSRR),預(yù)測(cè)第四象限雜質(zhì)的保留值。第五,開發(fā)選擇性差異較大的互補(bǔ)分離方法,驗(yàn)證優(yōu)化方法的分離能力。本論文未涉及此方面的工作。
　　本文以雜質(zhì)譜豐富的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素和青霉素類抗生素為分析對(duì)象,首次將“四象限”策略用于評(píng)價(jià)其復(fù)雜的雜質(zhì)譜HPLC分析方法。通過(guò)對(duì)上述內(nèi)容的研究,促進(jìn)了兩類抗生素