猴頭菌液體發(fā)酵及多糖的提取純化研究.pdf

1、猴頭菌(Hericium erinaceum)是食用真菌。近年來(lái)，猴頭菌以其豐富的營(yíng)養(yǎng)和獨(dú)特的生物活性，日益受到廣泛的關(guān)注。利用農(nóng)產(chǎn)品加工的副產(chǎn)品如米糠或麩皮等液體發(fā)酵生產(chǎn)猴頭菌多糖有一定的經(jīng)濟(jì)意義，有利于社會(huì)的發(fā)展和人民的身體健康。為實(shí)現(xiàn)這個(gè)目標(biāo)，本研究的主要內(nèi)容涉及以米糠為基礎(chǔ)培養(yǎng)基的猴頭菌的液態(tài)發(fā)酵、超聲輔助提取猴頭多糖、復(fù)合酶提取猴頭多糖、猴頭多糖純化及其抗氧化性能。
　　 以米糠為基礎(chǔ)培養(yǎng)基進(jìn)行猴頭菌液體發(fā)酵，分別進(jìn)行

2、了碳源、氮源、葡萄糖添加量、蛋白胨添加量、米糠添加量、無(wú)機(jī)鹽組成以及接種量、裝樣量、起始pH值、培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)溫度、轉(zhuǎn)速的單因素試驗(yàn)。在下列條件下：培養(yǎng)基中葡萄糖為20g/L、培養(yǎng)基pH為5.0、KH2PO4為1.5g/L、MgSO4為0.75g/L，接種量為10％、溫度為28C、轉(zhuǎn)速為150r/min，對(duì)目標(biāo)培養(yǎng)基中米糠濃度及蛋白胨添加濃度、250mL三角瓶培養(yǎng)基裝樣量三個(gè)因素進(jìn)行Box-Behnken響應(yīng)面試驗(yàn)，優(yōu)化發(fā)酵條件：目標(biāo)培

3、養(yǎng)基裝樣量為150mL，蛋白胨濃度為9.8g/L，米糠添加濃度為23.3g/L（先稱重米糠，再用煮出物配制），得到猴頭菌的菌絲干重為11.28g/L，總多糖量為3.64g/L。
　　 采用超聲輔助提取法提取猴頭菌多糖，考察了超聲功率、超聲提取時(shí)間、超聲間歇時(shí)間、超聲發(fā)出時(shí)間、液料比五個(gè)單因素，進(jìn)而用L9(34)正交試驗(yàn)優(yōu)化了工藝：液料比40:1，超聲功率1200W，超聲發(fā)出時(shí)間3s，超聲間歇時(shí)間2s，超聲時(shí)間15min，提取率為

4、75.9％。
　　 采用復(fù)合酶法提取猴頭菌多糖，進(jìn)行了纖維素酶和蝸牛酶的最適添加量、酶解溫度、酶解時(shí)間和pH值的單因素試驗(yàn)，選擇了纖維素酶添加量、蝸牛酶添加量、酶解時(shí)間3個(gè)因素作L9(34)正交試驗(yàn)，得到的最優(yōu)工藝參數(shù)為：酶解液pH值為6.5，酶解溫度35℃，纖維素酶添加量為1.5％，蝸牛酶添加量2.5％，酶解時(shí)間5h，提取率為98.4％。
　　 研究了猴頭多糖的脫雜和純化工藝：比較分析H2O2法、次氯酸鈣法以及活性炭吸

5、附脫色法的脫色效果，結(jié)果表明活性炭吸附法脫色效果最好；比較分析三氯乙酸法、sevage法、三氯乙酸-正丁醇法，結(jié)果表明Sevage法為脫蛋白較好的方法。
　　 使用DEAE-52纖維素對(duì)脫色脫蛋白后的猴頭多糖進(jìn)行純化，得到HEP1、HEP2、HEP3三個(gè)純多糖組分，經(jīng)測(cè)定，多糖純度分別為84.31％、78.47％和72.16％；同時(shí)進(jìn)行了理化檢測(cè)和紅外光譜分析。
　　 通過(guò)進(jìn)行猴頭多糖清除羥自由基、還原能力、清除DPPH