基于血糖血脂和肝功同步快速檢測的干試劑研究.pdf

1、目的： 隨著社會的不斷進步，人們對醫(yī)學檢驗多樣性的要求已越來越高，醫(yī)學檢驗已不再僅僅是在大醫(yī)院才開展，它已經進入到社區(qū)、家庭、現場等需要其存在的地方。為了肝功、血脂等生化檢驗項目的操作更簡便、儀器攜帶更方便、試劑保存更容易；為了使常規(guī)生化檢驗隨時隨地都可開展，以滿足健康體檢、社區(qū)醫(yī)療服務的需要，我們探討研制一種多孔生化反應板，將血糖血脂和肝功相關的七個常規(guī)生化指標組合在一起，通過對方法進行改良與改進，制成干化學試劑，探討同步檢測

2、的可行性，將多孔生化反應板與微型生化分析儀相結合，開發(fā)干試劑型多項目微型生化分析儀，以達到快速、簡便檢測的目的。該項目的成功也為開發(fā)適用范圍更廣、功能更完善的類似檢驗裝置奠定基礎。 由于本項目由多人協同攻關，這里重點介紹血糖血脂和肝功相關的幾個生化干試劑的研制。 方法： 1、為每一個測定的項目選擇一種合適的方法及試劑盒，要求試劑可以配制成單試劑工作液，能夠完全冷凍干燥，檢測波長在380nm～780nm之間。

3、 2、對試劑和測定方法進行改良和改進，使檢測方法能適應干試劑法檢測的需要。用白行合成的高靈敏色原——TBHBA替換葡萄糖試劑中的苯酚色原，其它方法根據需要調整樣品試劑稀釋比，提高方法的靈敏度。 3、將試劑工作液制成干試劑，對干燥的方法進行比較。采取冷凍干燥的方法時，加入凍干添加劑改善干試劑的復溶性和反應性，對添加劑的種類和濃度進行篩選。 4、對關鍵的檢測條件進行統(tǒng)一，以滿足多項生化板同步檢測的需要。將反應體系的終體積定

4、為200μl，使測量光徑約為7mm，反應溫度為37℃，反應時間為10min，觀察測定方法的線性范圍和靈敏度，并與生化分析儀方法進行比較。 5、用建立的干試劑方法對40例標本的血糖血脂和肝功進行同步檢測，將結果與生化分析儀結果進行比較，探討干試劑方法同步檢測血糖血脂和肝功的可行性。 主要結果： 1、以TBHBA替代酚試劑，添加10/L白蛋白凍干葡萄糖(氧化酶法)試劑，增加稀釋倍數，提高了反應速度，靈敏度提高了4.6

5、倍，增加了線性范圍，降低了檢測限，優(yōu)化的方法測定結果與全自動生化分析儀結果具有較好的一致性。 2、添加10g/L甘氨酸凍干甘油三酯(氧化酶法)試劑，降低稀釋倍數至1:50稀釋樣品對TG進行測定，結果較好的兼顧了靈敏度和線性范圍，顯色穩(wěn)定性較好，測定結果準確可靠，具有實用性。 3、添加10g/L白蛋白凍干總膽固醇(氧化酶法)試劑，降低稀釋倍數至1:50稀釋樣品，結果較好的兼顧了靈敏度和線性范圍，顯色穩(wěn)定性較好，測定結果與生

6、化分析儀的結果具有較好的一致性。 4、沒有找到適合凍干總蛋白和白蛋白試劑的添加劑，初步考察了不加添加劑的情況下凍干試劑的線性范圍和靈敏度，發(fā)現總蛋白超過80g/L、白蛋白超過40g/L時出現偏離線性的現象，靈敏度都有待提高。 5、選取了一種重氮試劑測定總膽紅素，用水溶解發(fā)色劑，然后冷凍干燥，用原裝試劑盒的溶解液稀釋標本進行檢測，方法的靈敏度較高，結果準確可靠。 6、選用丙酮酸氧化酶法試劑盒以速率法測定ALT，添加

7、10g/L白蛋白凍干試劑，ALT在3361U/L以下時線性良好(r=0.9978)，該方法測定結果與與乳酸脫氫酶紫外動力學法結果相比具有較好的一致性。 7、同步檢測的結果與全自動生化分析儀結果相關性都在0.95以上，系統(tǒng)比例誤差和恒定誤差都在可接受的范圍內，兩方法具有較好的一致性。 結論： 1、通過對方法的改進和改良，研制出了可結合多項生化板一步法測定血糖血脂和肝功的干試劑。 2、初步建立的血糖血脂和肝功