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文檔簡介
1、【目的】探討人中性粒細胞防御素以及細胞外核苷酸誘導呼吸道上皮細胞IL-8表達及其機制;克隆人中性粒細胞防御素基因cDNA,研究其cDNA在氣管上皮細胞的表達,以期為呼吸道感染與炎癥性疾病天然免疫發(fā)病機制的認識及其防治打下基礎.【方法】Biogel P-10分子篩層析分離中性粒細胞防御素,質(zhì)譜分析、毛細管電泳鑒定其純度和分子量,瓊脂糖彌散法檢測其抗菌活性.乳酸脫氫酶釋放實驗分析試劑對A549細胞毒作用.LiquiChip分析儀測定10種炎
2、癥反應相關細胞因子的水平.ELISA法測定A549刺激實驗和刺激抑制實驗的細胞培養(yǎng)上清IL-8濃度.RT-PCR方法檢測A549細胞P2Y受體mRNA表達.反義寡核苷酸技術進行P2Y受體阻斷實驗,生物發(fā)光法分析培養(yǎng)上清ATP含量.同位素<'125>I和熒光素FITC標記,進行中性粒細胞防御素與A549細胞的結(jié)合實驗分析.增強型綠色熒光蛋白IL-8報告基因檢測ATP刺激后A549細胞報告基因表達.脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染重組表達質(zhì)粒pBabe-Neo
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