

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領
文檔簡介
1、目的:研究核轉(zhuǎn)錄因子Snail在二氧化硅(SiO2)誘導的人支氣管上皮細胞(HBE)上皮一間質(zhì)轉(zhuǎn)型(EMT)中的作用機制。
方法:以200μ g/mlSiO2刺激的HBE細胞為模型,⑴不同時間點(0、1、6、12、18、24h)用倒置顯微鏡觀察HBE細胞形態(tài)學改變;⑵不同時間點(0、24h)用電子顯微鏡觀察HBE細胞超微結(jié)構(gòu)改變;⑶不同時間點(0、1、6、12、18、24h)用Western-Blot檢測HBE細胞Snai
2、l總蛋白表達水平的變化;⑷不同時間點(0、1、6、12、18、24h)用Western-Blot檢測HBE細胞Snail核蛋白表達水平的變化;⑸不同時間點(0、1、6、12、18、24h)用免疫細胞熒光檢測HBE細胞Snail的核定位情況;⑹不同時間點(0、12、18h)用EMSA檢測HBE細胞Snail DNA結(jié)合活性的變化情況;(7)RNA干擾Snail的表達后,Western-Blot檢測HBE細胞Snail、α-SMA、Vime
3、ntin、E-cad蛋白表達水平的變化。
結(jié)果:⑴倒置顯微鏡觀察結(jié)果顯示:HBE細胞與SiO2共育后,隨著時間的延長,原呈鋪路石樣排列的HBE細胞出現(xiàn)梭形、紡錘形改變,間隙略微增寬。⑵電鏡結(jié)果顯示:對照組的細胞大多為圓形,表面微絨毛豐富;SiO2誘導HBE細胞24h時梭形多見,細胞核多形性,細胞表面微絨毛結(jié)構(gòu)減少甚至缺失,代之表現(xiàn)為突起,胞漿內(nèi)出現(xiàn)大量管狀結(jié)構(gòu),次級溶酶體內(nèi)可見細胞吞噬的SiO2顆粒。⑶Western-bl
4、ot檢測總蛋白的結(jié)果顯示:在SiO2作用下,Snail表達隨著時間的延長逐漸上調(diào),18h表達達到頂峰,之后逐漸下降;12h組和18h組Snail蛋白的表達水平分別為(2.88±0.63)和(4.51±1.15),與對照組的(0.57±0.04)相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P(0.05)。⑷Western-blot檢測核蛋白的結(jié)果顯示:在SiO2作用下,Snail表達隨著時間的延長逐漸上調(diào),12h表達達到頂峰,之后逐漸下降;12h組和18h
5、組Snail蛋白的表達水平分別為(4.51±0.81)和(2.76±0.77),與對照組的(0.67±0.15)相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。⑸免疫細胞熒光結(jié)果顯示:對照組可見到微弱熒光表達于胞漿,核內(nèi)未見表達;實驗組熒光主要表達于細胞核,隨著SiO2作用時間的延長,Snail表達逐漸向核內(nèi)移位。⑺EMSA結(jié)果顯示:在SiO2作用下,12h組和18h組Snail DNA結(jié)合活性的表達水平分別為(0.020±0.00047)和
6、(0.023±0.0011),與對照組的(0.0014±0.00026)相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),表明SnailDNA結(jié)合活性明顯升高。⑺siRNA結(jié)果顯示:①刺激組和干擾組Snail蛋白的表達水平分別為(20.02±1.44)和(6.73±1.03),差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),表明siRNA干擾后Snail表達下調(diào),抑制率為66.38%;②刺激組和干擾組E-cad蛋白的表達水平分別為(0.18±0.03)和(0
7、.84±0.01),差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),表明siRNA干擾后E-cad表達上調(diào):③刺激組和干擾組α-SMA和vimentin蛋白的表達水平分別為(2.35±0.45)和(0.23±0.05),(13.12±1.09)和(2.33±0.54),差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),表明siRNA干擾后α-SMA和vimentin表達下調(diào),抑制率分別為90.21%和82.24%。
結(jié)論:①SiO2可誘導人支氣管上皮
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- MAPK信號通路在二氧化硅誘導的人支氣管上皮細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)型中的作用機制研究.pdf
- Rho-ROCK信號通路在矽塵誘導的人支氣管上皮細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)型中的作用機制研究.pdf
- 脫氫表雄酮對支氣管上皮細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用及機制.pdf
- 蟲草菌液抑制CSE誘導的人支氣管上皮細胞衰老的機制研究.pdf
- 氧化應激對支氣管上皮細胞CFTR門控功能及調(diào)控機制研究.pdf
- 自噬在慢性砷誘導的人支氣管上皮細胞轉(zhuǎn)化中的作用.pdf
- GSTM5對TNF-α誘導的人支氣管上皮細胞氧化損傷的調(diào)節(jié)作用研究.pdf
- 游離二氧化硅誘導大鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞轉(zhuǎn)分化及其時間-效應關系.pdf
- 甲醛染毒對人支氣管上皮細胞炎性因子影響及作用機制研究.pdf
- 支氣管上皮細胞參與哮喘炎癥的研究.pdf
- 五氧化二釩誘導人支氣管上皮細胞COX-2表達增加及其抗凋亡作用.pdf
- 輻射誘導的外泌體miRNA介導的人支氣管上皮細胞旁效應研究.pdf
- 微囊藻毒素-LR誘導人支氣管上皮細胞凋亡及其機制研究.pdf
- 介孔、納米二氧化硅誘導人肺泡上皮細胞凋亡與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激及其機制的研究.pdf
- 人支氣管上皮細胞共培養(yǎng)對肺成纖維細胞的作用及調(diào)控機制.pdf
- MiR-702-3p調(diào)控TGF-β1在納米二氧化硅致肺上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用機制研究.pdf
- 人支氣管上皮細胞的獲取與培養(yǎng).pdf
- 支氣管上皮細胞在哮喘氣道重建中的作用.pdf
- 線粒體介導砷致人支氣管上皮細胞(HBE)氧化損傷的研究.pdf
- 香煙煙霧凝集物誘導人支氣管上皮細胞IL-8表達的機制.pdf
評論
0/150
提交評論