金雀異黃素對培養(yǎng)的人RPE細胞誘導凋亡作用及機制的研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩63頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、視網(wǎng)膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)具有許多生物學功能,對視網(wǎng)膜完整性和正常功能的維持起著重要作用。RPE細胞和Bruch's膜連接的破壞會導致具有特征性的病理學后果。視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層中的感光細胞層和RPE細胞連接的破壞,可以導致光感受器功能受損。RPE細胞和脈絡(luò)膜連接的破壞導致增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變(proliferative vitreoretinopathy, PVR)<'[1]>。在糖尿

2、病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy,DR)、視網(wǎng)膜脫離及視網(wǎng)膜脫離復位術(shù)后、眼外傷和炎癥性眼病損傷修復過程中,PVR是最棘手的的并發(fā)癥之一<'[1]>。大多數(shù)學者認為,RPE細胞的移行、增殖是PVR形成的主要原因<'[2,3]>。PVR早期的發(fā)病機制包括RPE細胞的增殖,正常休眠和分化的RPE細胞與Bruch's膜的分離、增殖,最終導致PVR。因此,抑制RPE細胞的增殖,誘導其凋亡,為研究增生性視網(wǎng)膜疾病的發(fā)病機制和

3、治療提供可能性。金雀異黃素(genistein,Gen)是大豆異黃酮的主要成分,可以通過多種機制最終導致細胞凋亡。它打破了細胞周期G1/S的轉(zhuǎn)換,在G2/M期阻滯細胞周期的循環(huán)和誘導各種細胞凋亡<'[4-7]>。據(jù)報道,Gen是一種安全有效的藥物,對于上皮細胞,IC<,50>(半數(shù)抑制濃度)為12.5uM,LC<,50>(半數(shù)致死濃度)>300uM<'[8,9]。大量動物實驗證實,Gen長期口服,可以有效的改善實驗性視網(wǎng)膜病變的生化、組

4、織病理和形態(tài)學改變<'[10-13]>。引。為了研究Gen對PVR的作用,我們體外培養(yǎng)RPE細胞,研究Gen對RPE細胞的作用并探討其作用機制。 目的: 人RPE細胞在視網(wǎng)膜病理、生理過程中扮演著重要角色。RPE細胞的移行、增殖導致RPE細胞和神經(jīng)上皮層連接的破壞,從而導致PVR。我們研究Gen對培養(yǎng)的人RPE細胞的誘導凋亡作用,并探討其作用機制。 方法: 體外用Gen處理RPE細胞(特指ARPE-19)

5、。細胞貼壁生長后,用不同濃度的Gen(0、25、50、100、200umol/L)處理RPE細胞24h。光鏡觀察細胞形態(tài)變化。MTT法檢測細胞活性。為了研究Gen導致的生長抑制的機制,流式細胞儀分析細胞周期;PI、Annexin V-FITC雙染色分析細胞凋亡。Gen處理RPE細胞后,MAPK信號通路是變化最顯著的指標之一。Western blot方法檢測MAPK通路的激活。 結(jié)果: 正常培養(yǎng)的APRE-19細胞呈扁平多

6、角形,胞質(zhì)內(nèi)有少量色素顆粒,細胞無色透明。加入不同濃度的Gen 24h后,對照組相比: (1)細胞體積縮小,胞漿濃縮,密度增加,部分脫落呈懸浮狀。 (2)RPE細胞生長明顯受到抑制,生長抑制率明顯增高,分別為6.44±2.0、14.71±0.8、28.97±1.5、45.75±0.9,且隨著Gen濃度的增大,對細胞的生長抑制效應(yīng)更加明顯,呈劑量依賴性。 (3)細胞周期檢測結(jié)果顯示,G2/M期細胞增多,G1期細胞減

7、少,伴隨S期和凋亡細胞增多,呈劑量依賴性,表現(xiàn)出G2/M期阻滯。 (4)細胞凋亡率明顯增高,分別為(16.87±1.3)%、 (19.44±0.9)%、(23.14±2.4)%、(34.81±2.8)%,隨著Gen濃度的增高,誘導凋亡作用增強,呈劑量依賴性。 (5)p-ERK1/2表達下調(diào),p-p38表達下調(diào),未檢測出p-JUK和p-BMK1的表達。ERK1/2的激活與Gen誘導的細胞凋亡呈負相關(guān),p38的激活與凋亡可能

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論