HBV對ANG的體外調控作用及機制研究.pdf

1、研究目的
　　觀察HBV對ANG的調控作用及其機制，并觀察抑制ANG對細胞增殖的影響。
　　研究方法
　　利用HepG2.2.15細胞模型及質粒pcDNA3.1-HBx轉染的HepG2細胞，通過Real-time PCR檢測ANG mRNA及Elisa，Western Blot檢測ANG蛋白變化，觀察HBV/HBx對ANG的調控作用。通過Western Blot及Elisa檢測HBV/HBx對IL-6的調控作用，并檢測

2、IL-6刺激及抗體封閉IL-6活性后ANG細胞內外蛋白含量的變化。Western Blot檢測HBV/HBx對HIF-1α的調控作用，并Western Blot檢測HIF-1αsiRNA沉默HIF-1α基因后，ANG蛋白表達的變化。采用免疫熒光方法檢測HBV對ANG核轉移的影響。通過ANG siRNA(50nM)轉染HepG2.2.15細胞及使用ANG核轉移抑制劑neomycine，MTT檢測細胞抑制率，并檢測ANG基因沉默后核糖體RN

3、A45S RNA的合成變化。
　　研究結果
　　Real-time PCR及Elisa，Western Blot結果顯示在HBV病毒穩(wěn)定復制的HepG2.2.15細胞及轉染X蛋白的HepG2-HBx細胞中，ANG mRNA及蛋白水平均高于對照組。Real-time PCR結果顯示在HepG2-HBx細胞中ANG水平升高45SRNA轉錄水平升高，ANG基因沉默后其轉錄水平降低。Western Blot結果顯示，HepG2.2.

4、15細胞及HepG-HBx細胞中IL-6及HIF-1α蛋白水平均高于對照組。Real-time PCR及Elisa結果顯示IL-6刺激后ANG mRNA及蛋白水平均明顯升高，抗體封閉IL-6活性后，ANG蛋白表達降低。Western Blot及Elisa結果顯示，HIF-1α基因沉默后，ANG蛋白表達降低。免疫熒光結果顯示較于對照，2215細胞中核轉移明顯被促進。MTT結果顯示，HepG2.2.15細胞中ANG基因沉默或加入核轉移抑制劑