克霉唑誘導(dǎo)的人結(jié)腸癌細(xì)胞CCL229凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文克霉唑誘導(dǎo)的人結(jié)腸癌細(xì)胞CCL229凋亡的實(shí)驗(yàn)研究姓名：趙欣申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：宋今丹2002.3.1腸癌CCL229細(xì)胞凋亡的作用，為CLT作為抗腫瘤藥應(yīng)用于臨床提供了進(jìn)一步的理論依據(jù)。／實(shí)驗(yàn)材料與方法I＼本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用培養(yǎng)的高侵襲性人結(jié)腸癌CCL229細(xì)胞，檢測(cè)克霉唑誘導(dǎo)CCL229細(xì)胞凋亡的作用。收集處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以105／ml濃度接種細(xì)胞，培養(yǎng)24小時(shí)待細(xì)胞貼壁后給藥。CLT以

2、無(wú)水乙醇配成01mol／L貯存液，4。C保存，使用終濃度分別為25／amo]／L，30弘mol／L，35ixmol／L。對(duì)照組加入等體積無(wú)水乙醇((01％，V／V)，此濃度下乙醇對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)明顯影響。實(shí)驗(yàn)組每隔48小時(shí)換新鮮培養(yǎng)液及CLT。藥物處理不同時(shí)間后收集實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組細(xì)胞。利用熒光顯微鏡、電子顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)變化，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期變化及亞二倍體比例，并利用DNA瓊脂糖凝膠電泳及TUNEL法進(jìn)行凋亡的分子生物學(xué)檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)

3、結(jié)果濃度分別為25panol／L，30燦mol／L，35lamol／L的CLT作用于體外培養(yǎng)的人結(jié)腸癌細(xì)胞CCL229。對(duì)照組加入等體積無(wú)水乙醇(01％，v／V)。熒光顯微鏡下見(jiàn)AO染色的對(duì)照組CCL229細(xì)胞核呈黃綠色熒光，染色均勻一致。經(jīng)301amol／LCLT作用后可見(jiàn)胞核固縮，染色質(zhì)高度濃縮凝聚，分塊成亮黃色熒光。凋亡嚴(yán)重時(shí)，細(xì)胞出泡形成凋亡小體。透射電鏡下，CCL229細(xì)胞經(jīng)30panol／LCLT處理24小時(shí)后，核內(nèi)染色質(zhì)邊