克霉唑誘導的人結腸癌細胞CCL229凋亡的實驗研究.pdf_第1頁
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1、中國醫(yī)科大學碩士學位論文克霉唑誘導的人結腸癌細胞CCL229凋亡的實驗研究姓名:趙欣申請學位級別:碩士專業(yè):細胞生物學指導教師:宋今丹2002.3.1腸癌CCL229細胞凋亡的作用,為CLT作為抗腫瘤藥應用于臨床提供了進一步的理論依據。/實驗材料與方法I\本實驗應用培養(yǎng)的高侵襲性人結腸癌CCL229細胞,檢測克霉唑誘導CCL229細胞凋亡的作用。收集處于對數(shù)生長期的細胞,以105/ml濃度接種細胞,培養(yǎng)24小時待細胞貼壁后給藥。CLT以

2、無水乙醇配成01mol/L貯存液,4。C保存,使用終濃度分別為25/amo]/L,30弘mol/L,35ixmol/L。對照組加入等體積無水乙醇((01%,V/V),此濃度下乙醇對細胞生長無明顯影響。實驗組每隔48小時換新鮮培養(yǎng)液及CLT。藥物處理不同時間后收集實驗組及對照組細胞。利用熒光顯微鏡、電子顯微鏡觀察細胞的形態(tài)變化,流式細胞儀檢測細胞周期變化及亞二倍體比例,并利用DNA瓊脂糖凝膠電泳及TUNEL法進行凋亡的分子生物學檢測。實驗

3、結果濃度分別為25panol/L,30燦mol/L,35lamol/L的CLT作用于體外培養(yǎng)的人結腸癌細胞CCL229。對照組加入等體積無水乙醇(01%,v/V)。熒光顯微鏡下見AO染色的對照組CCL229細胞核呈黃綠色熒光,染色均勻一致。經301amol/LCLT作用后可見胞核固縮,染色質高度濃縮凝聚,分塊成亮黃色熒光。凋亡嚴重時,細胞出泡形成凋亡小體。透射電鏡下,CCL229細胞經30panol/LCLT處理24小時后,核內染色質邊

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