許氏平鲉(Sebastes schlegelii)EST-SSR標記開發(fā)及快速生長選育系遺傳結構分析.pdf

1、許氏平鲉（Sebastes schlegelii）是我國北方近海重要的巖礁性魚類，由于具有廣溫廣鹽習性，可以自然越冬，也是我國北方沿海深水網(wǎng)箱養(yǎng)殖和增殖放流的適宜經(jīng)濟魚種，但近年來其漁業(yè)資源減少嚴重，因此進行許氏平鲉人工繁育及良種選育具有重要的經(jīng)濟效益和社會效益。微衛(wèi)星標記技術能夠為許氏平鲉良種選育提供一定的技術支持，尤其是在分子標記輔助育種等方面。EST-SSR開發(fā)成本低，且在不同物種間具有一定的通用性，已經(jīng)成為新型高效的開發(fā)微衛(wèi)星標

2、記的途徑。許氏平鲉是卵胎生魚類，具有一雌多雄的交配模式，對其選育系的遺傳結構進行監(jiān)測、分析其遺傳多樣性以及遺傳分化情況具有十分重要的實踐意義。本研究首次利用已發(fā)表的許氏平鲉EST序列進行EST-SSR標記開發(fā)，以期為許氏平鲉良種選育提供更多標記選擇，同時選用8對擴增效果好、多態(tài)性豐富的微衛(wèi)星引物對17個許氏平鲉快速生長選育系的遺傳結構進行分析，以期為許氏平鲉種質資源保護、良種選育等工作提供支持。
　　1、許氏平鲉EST-SSR標記

3、的開發(fā)及通用性檢測
　　從NCBI公共數(shù)據(jù)庫下載的1980條EST序列經(jīng)拼接、SSR位點查找后，發(fā)現(xiàn)EST-SSR位點的發(fā)現(xiàn)率為9.14％，所有EST-SSR位點中完美型比例占到91.52%，其中，二堿基重復出現(xiàn)頻率最高，以TG/CA基序最多，三堿基重復類型最多，四到六堿基所有重復類型皆出現(xiàn)一次。
　　從中挑選、設計引物56對，46對引物能夠有效擴增，18個位點具有多態(tài)性。18個多態(tài)位點共檢測出70個等位基因，每個位點觀測等

4、位基因數(shù)（Na）為2～9，平均觀測等位基因數(shù)為3.89；平均觀測雜合度（Ho）和平均期望雜合度（He）分別達到0.3037和0.3757；每個位點的平均多態(tài)信息含量（PIC）為0.3419，中高度多態(tài)位點比例達到50.00%；經(jīng)Bonferroni校正后，仍有3個位點顯著偏離Hardy-Weinberg平衡（P<0.0028），但兩兩位點間不存在連鎖不平衡現(xiàn)象。
　　位點通用性檢測結果顯示，在朝鮮平鲉中除位點HJ606和HJ418

5、3其余位點均能有效擴增，其中6個位點多態(tài)；在褐菖鲉中所有位點均能有效擴增，除位點HJ4215和HJ4286單態(tài)外其余位點均為多態(tài)；18個位點在朝鮮平鲉和褐菖鲉中的通用率分別是88.89%和100%，多態(tài)率為33.33%和88.89%。
　　本研究開發(fā)的許氏平鲉EST-SSR標記多態(tài)性較高，在近緣物種中具有很高的通用性，可用于許氏平鲉系統(tǒng)進化分析、近緣種通用性檢測以及分子標記育種等工作，并且為許氏平鲉良種選育以及構建更高密度遺傳連鎖

6、圖譜提供了更多的標記選擇。
　　2、17個許氏平鲉快速生長選育系的遺傳結構分析
　　本研究采用高分辨率的毛細管電泳進行SSR分型檢測，8個標記在17個選育系中共檢測到181個等位基因。選育系遺傳多樣性分析結果顯示，17個選育系的平均觀測等位基因數(shù)（Na）為6.0318，觀測雜合度（Ho）和期望雜合度（He）均值分別達到了0.8417和0.7201，表明17個快速生長選育系的遺傳多樣性較高，仍具有很大的選育潛力。
　　選

7、育系遺傳結構分析結果顯示，遺傳分化指數(shù)（Fst）在0.0750～0.3301之間，最小值存在于選育系 FH（日照）和FB（青島）之間，而最大值存在于SH（長島子一代）和SE（榮成♀×青島♂）之間，選育系間平均遺傳分化指數(shù)達到0.2017，即20.17%的遺傳變異來自于選育系間，而79.83%的遺傳變異來自選育系內個體間差異，多重比較結果顯示17個選育系間遺傳分化均達到極顯著水平。表明：本結果可為許氏平鲉下一步良種選育中的親魚配對策略提供