乳腺癌中Vmp1表達及預后意義和Nek2剪接體在乳腺癌發(fā)生不同階段表達差異的研究.pdf

1、本研究分為二部分：
　　 第一部分、空泡膜蛋白1在乳腺浸潤性導管癌中的表達及與預后的關(guān)系
　　 目的：
　　 1.探討空泡膜蛋白1在人乳腺浸潤性導管癌和含導管原位癌成分的浸潤性導管癌組織中的蛋白表達情況。
　　 2.初步闡述在人乳腺組織中空泡膜蛋白1的表達規(guī)律及空泡膜蛋白1的表達與預后的關(guān)系。
　　 方法：
　　 隨機抽取乳腺浸潤性導管癌組織102例，其中32例為含導管原位癌成分。采用免疫

2、組織化學方法檢測空泡膜蛋白1在乳腺浸潤性導管癌組織中的表達、定位，并與其它多個臨床病理參數(shù)進行比較分析。全部數(shù)據(jù)由SPSS19.0統(tǒng)計軟件完成統(tǒng)計學分析，x2檢驗用于定性資料間的比較，Spearman's相關(guān)性檢驗用于變量間的相關(guān)性分析，Kaplan-Meier生存曲線進行生存分析，用log-rank檢驗分析生存曲線的差異。應用COX比例風險回歸模型(Cox's proportional hazardsregression model，

3、簡稱Cox模型)行多因素分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果：
　　 1、免疫組織化學結(jié)果顯示空泡膜蛋白1在乳腺組織中陽性著色部位為細胞質(zhì)，細胞質(zhì)中可見棕黃色顆粒著色，陽性率為57.8％，在乳腺浸潤性導管癌組織中空泡膜蛋白1的表達與不同的腫瘤組織學分級（x2=12.644，P=0.002），pTNM分期(x2=11.987，P=0.001)，淋巴結(jié)狀態(tài)（x2=9.341，P=0.002），腫物最大徑（x2

4、=7.630，P=0.022），NPI(x2=15.561，P=0.000)密切相關(guān)，差異有統(tǒng)計學意義。
　　 2、在32例含有導管原位癌成分的浸潤性導管癌病例中，空泡膜蛋白1表達率在導管原位癌中比其旁的浸潤性導管癌中要高，且差異有統(tǒng)計學意義（x2=4.433,P=0.035）。
　　 3、患者術(shù)后平均無病生存期81.2個月，五年總生存率為90.1％，無病生存率為81.3％。空泡膜蛋白1的表達對無病生存曲線分布有明顯影響

5、，我們的結(jié)果發(fā)現(xiàn)其中空泡膜蛋白1陰性表達的患者比陽性表達的患者預后差(x2=11.192，P=0.001)，多因素分析顯示空泡膜蛋白1是一個保護因素，相對危險度＜1。
　　 結(jié)論：
　　 空泡膜蛋白1蛋白在乳腺組織中表達，陽性表達部位均為細胞質(zhì)，空泡膜蛋白1蛋白的表達率在導管原位癌中比浸潤性導管癌組織中要高，此外我們的研究結(jié)果還顯示浸潤性導管癌組織中空泡膜蛋白1蛋白的表達具有較良好的估測預后價值，當空泡膜蛋白1陽性提示預

6、后較好。
　　 第二部分、Nek2三種剪接異構(gòu)體在乳腺癌發(fā)生不同階段組織中表達差異的研究
　　 目的：
　　 探索中心體相關(guān)蛋白激酶2 (NIMA-related kinase2,Nek2)的三個剪接異構(gòu)體Nek2A, Nek2B,Nek2C在乳腺上皮惡性轉(zhuǎn)化中的作用，并結(jié)合本課題組前期研究成果，進一步探討乳腺癌早期診斷標志物及預后檢測指標，并為研究癌前病變、早期癌變的基因治療提供理論基礎和實驗依據(jù)。
　　

7、 方法：
　　 抽取簡單模擬人乳腺癌多階段發(fā)生、發(fā)展模式的四組乳腺組織石蠟標本:正常組織及一般性增生20例、不典型增生20例、導管原位癌20例和浸潤性導管癌(非特殊型)20例，采用原位雜交的方法同時檢測四組樣本中三個剪接異構(gòu)體的mRNA表達水平，并進行組間兩兩比較。加大上述四組標本量各至60例同時采用免疫組織化學方法檢測Nek2B的蛋白表達、定位，并與其他多個臨床病理參數(shù)進行比較分析。
　　 結(jié)果：
　　 1、

8、光鏡下觀察結(jié)果，可見導管上皮陽性細胞胞漿內(nèi)呈均勻著色的淡黃色-棕/黃色顆粒，陽性細胞密集或(和)散在分布，乳腺正常組織和不典型增生組陽性率和強度小于導管原位癌和浸潤性導管組，隨著組織類型的惡性程度的增加，Nek2A, Nek2B, Nek2C mRNA表達的陽性率也呈逐漸上升趨勢，正常導管上皮陽性率最低分別為(15.0%, 20.0%, 25%)，發(fā)展到浸潤性導管癌時達最高分別為(65.0%, 65%, 80%)。兩兩組間比較Nek2A

9、, Nek2B,Nek2C mRNA表達水平:浸潤性導管癌組明顯高于正常乳腺組(P=0.002, P=0.004, P=0.000)和不典型增生組(P=0.006, P=0.009, P=0.004)，導管原位癌組高于正常乳腺組(P=0.003，P=0.020, P=0.001)和不典型增生組(P=0.009, P=0.040, P=0.035)。不典型增生組高于正常乳腺組(P=0.637, P=0.786, P=0.461)、導管原位

10、癌組和浸潤性導管癌組均沒有顯著性差異((P=0.698, P=0.602, P=0.445)。
　　 2、組織陽性表達部位為細胞質(zhì)，與正常乳腺組織相比，Nek2B蛋白的表達水平在導管原位癌和浸潤性導管癌中增高(P =0.002, P =0.000)，在浸潤性導管癌組中，Nek2B的蛋白表達在不同的腫瘤大小(P<0.001)，組織學級別(P =0.011),分子亞型(P=0.021)和ki-67 (P=0.017)間差異有統(tǒng)計學意

11、義。相關(guān)分析顯示:在浸潤性導管癌組織中，Nek2B蛋白的表達與組織學分級呈正相關(guān)(r=0.426, P=0.001)。
　　 結(jié)論：
　　 1、在簡單模擬乳腺癌多階段發(fā)生、發(fā)展模式(正常乳腺上皮細胞→導管上皮不典型增生→導管原位癌→浸潤性癌)中Nek2A, Nek2B, Nek2C mRNA的表達水平表現(xiàn)為逐步增加的趨勢。
　　 2、在浸潤性導管癌中Nek2B蛋白的表達與組織學分級呈正相關(guān)。Nek2B蛋白表達在導