PeroxiredoxinⅠ和Ⅱ在輸卵管和子宮的分布與表達及PeroxiredoxinⅡ對小鼠植入前胚發(fā)育的作用.pdf

1、目的： 觀察抗氧化酶Peroxiredoxin I和Ⅱ(Prx I和Ⅱ)在昆明小鼠輸卵管和子宮的分布及其周期性變化。觀察PrxⅡ對昆明小鼠植入前胚發(fā)育和克服2-細胞阻滯的作用。 方法： 1.免疫組織化學方法觀察Prx I和Ⅱ在昆明小鼠輸卵管和子宮的分布。 2.蛋白免疫印跡技術檢測Prx I和Ⅱ在小鼠動情期和動情間期的表達變化。 3.收集昆明小鼠1.細胞胚，采用微滴培養(yǎng)法連續(xù)培養(yǎng)，觀察在M16培養(yǎng)液

2、中添加PrxⅡ蛋白對植入前胚發(fā)育的影響，觀察其是否能克服2-細胞阻滯。 4.收集昆明小鼠(阻滯品系小鼠)和B6C3F1小鼠(非阻滯品系小鼠)1-細胞胚，采用微滴培養(yǎng)法連續(xù)培養(yǎng)，觀察在M16培養(yǎng)液(37℃、5％CO2和飽和濕度培養(yǎng)條件下)各自的發(fā)育情況。 5.應用激光共聚焦掃描顯微鏡技術結合特異性熒光探針2’，7’二氯熒光黃雙乙酸酯，檢測昆明小鼠體外培養(yǎng)與體內發(fā)育2.細胞胚以及昆明小鼠與B6C3F1小鼠體外培養(yǎng)2-細胞胚內

3、活性氧自由基(ROS)水平差異。 結果： 1.在輸卵管中，Prx I和Ⅱ免疫陽性反應見于輸卵管上皮；而子宮內，PrxI免疫陽性反應分布于內膜上皮、腺體上皮和內膜基質內細胞，而PrxⅡ主要見于內膜基質內細胞。 2.蛋白免疫印跡技術也顯示這兩型蛋自在輸卵管和子宮均表達，動情期和動情間期這兩型蛋白在輸卵管和子宮中的表達水平無顯著性差異。 3.昆明小鼠1-細胞胚在添加PrxⅡ蛋白的MI 6培養(yǎng)液中培養(yǎng)，其4-細胞

4、胚發(fā)育率與對照組無顯著性差異。 4.昆明小鼠1-細胞胚在M16中培養(yǎng)多數停滯于2-細胞期，基本無法發(fā)育至囊胚；而B6C3F1小鼠1-細胞胚發(fā)育良好，絕大多數可越過2-細胞期且大多數可發(fā)育至囊胚，兩者的4-細胞胚和囊胚發(fā)育率均有顯著性差異。 5.昆明小鼠體外培養(yǎng)2-細胞胚內ROS水平顯著低于體內發(fā)育2.細胞胚，差別有顯著性意義；亦低于B6C3F1小鼠體外培養(yǎng)2-細胞胚內ROS水平，但差別無顯著性意義。 結論：