捕獲法ELISA檢測TP-IgM抗體在各期梅毒的診斷及療效觀察方面的臨床應用.pdf

1、目的：
　　 梅毒是由梅毒螺旋體(Treponema pallidum,TP)引起的一種性傳播疾病,其主要通過性行為和血液傳播,也可通過胎盤母嬰垂直傳播。近年來我國的梅毒發(fā)病率有逐年上升的趨勢。梅毒患者是梅毒的惟一傳播源,對梅毒進行早診斷、早治療是控制其蔓延至關重要的一個環(huán)節(jié)。梅毒螺旋體可侵犯全身各臟器,造成多器官病變、功能失常、組織破壞,甚至死亡,對人們的健康構成了嚴重的威脅。由于梅毒螺旋體具有較強的傳染性和病程的復雜性,且梅

2、毒在早、中期臨床表現(xiàn)不顯著,常常造成病人對病情的忽視,給病人身體健康帶來極大的危害,也使梅毒的傳播更為加快。
　　 血清學檢測是診斷梅毒的重要實驗室檢測方法。目前梅毒的血清學檢測方法主要有兩種:一類是非梅毒螺旋體抗原血清試驗,如快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗(RPR)、甲苯胺紅不加熱血清試驗(TRUST)等,此類試驗檢測的是心磷脂抗體,為非特異性抗體檢測試驗,常用作梅毒的篩查試驗,亦可用于梅毒的療效觀察、復發(fā)及再感染。由于此類實驗受

3、多種因素影響,常出現(xiàn)生物學假陰性和假陽性結果,對一、三期梅毒的陽性率不高,因此僅適于二期梅毒的診斷,而不適于診斷一、三期梅毒,包括潛伏梅毒、神經(jīng)梅毒的診斷。作療效觀察時,常出現(xiàn)血清學固定,使臨床醫(yī)生難以判斷治療終點。另一類是梅毒螺旋體抗原血清實驗,如梅毒螺旋體血球凝集試驗(TPHA)、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(TPPA)、熒光密螺旋體抗體吸收試驗(FTA-ABS)、梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(TP-ELISA)等,這類試驗的敏感性高、特異

4、性強,臨床常用此類試驗作為梅毒的確認試驗。但是此類試驗檢測的是梅毒螺旋體IgG抗體和IgM抗體,而IgG抗體長期存在,血清反應持續(xù)存在陽性,不能用作梅毒治療的療效觀察。因此迫切需要尋求一種敏感性高、特異性強的梅毒早期檢測方法,為臨床早期診斷、早期治療及驅梅治療后的療效觀察提供確切的實驗依據(jù)。
　　 抗梅毒螺旋體IgM抗體是梅毒感染最早產(chǎn)生的抗體,患者一般感染后兩周即可從血清中測出,因此是梅毒早期感染并活動的標志。經(jīng)有效治療后Ig

5、M抗體消失,晚期潛伏梅毒患者出現(xiàn)IgM抗體陽性,需要考慮是否再感染或體內(nèi)未清除病灶再燃的情況。此外,TP-IgM抗體對診斷先天性梅毒和神經(jīng)梅毒具有重要意義.由于IgM抗體的分子量較大,不能透過胎盤屏障和血腦屏障等天然屏障,如若在新生兒血液中或成人腦脊液中檢測到TP-IgM抗體,則可診斷先天性梅毒或神經(jīng)性梅毒。目前認為TP-IgM抗體測定可用于:①梅毒的早期診斷；②梅毒治療后的療效觀察；③梅毒復發(fā)或再感染的判斷；④新生兒胎傳梅毒的診斷；⑤

6、神經(jīng)梅毒的診斷。本研究旨在探討各期梅毒患者血清抗梅毒螺旋體IgM抗體的檢測情況和臨床意義,并評價捕獲法ELISA檢測TP-IgM抗體對各期梅毒治療后的隨訪意義。
　　 隨著分子生物學、免疫學和基因工程技術的迅速發(fā)展,隨著基因工程技術制備梅毒螺旋體特異蛋白抗原的成功,TP-IgM抗體檢測已經(jīng)逐漸應用于實驗室診斷中。但是目前各實驗室對捕獲法ELISA檢測TP-IgM抗體檢測方法應用于臨床的評估較少,并且我國學者對TP-IgM抗體在療

7、效觀察方面的研究開展的也較少。本實驗通過大量的臨床樣本驗證了捕獲法ELISA檢測對早期梅毒的診斷具有較高的靈敏度和特異性,在療效觀察方面優(yōu)于RPR,是一種良好的早期梅毒診斷和療效觀察的實驗室指標,為我國日趨嚴峻的梅毒防治工作的改善奠定理論和實驗基礎。
　　 材料與方法
　　 一、實驗材料
　　 本實驗所有標本均來自沈陽市第六人民醫(yī)院性病門診患者血清；
　　 快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗(RPR)試劑盒購自上

8、海榮盛生物技術有限公司:
　　 梅毒螺旋體明膠凝集試驗(TPPA)試劑盒購自日本富士株式會社；
　　 梅毒螺旋體IgM抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(TP-ELISA)試劑盒由北京熱景生物有限公司提供；
　　 高速離心機(Sigma,USA):
　　 酶標儀(BIO-RAD Model 680)；
　　 洗板機(BIO-RAD Model 1575 Immun Wash)；
　　 電熱恒溫培養(yǎng)箱(D

9、RP-9082,上海森信實驗儀器有限公司公司)；
　　 微樣加樣器(Eppendor,German)。
　　 二、實驗方法
　　 1、收集患者血清樣本。
　　 2、采用快速血漿反應素試驗(RPR)和梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(TPPA)檢測初診未治療患者血清,進行篩查和確認。
　　 3、采用捕獲法ELISA檢測初診梅毒患者梅毒螺旋體IgM抗體,并與TPPA相比較。
　　 4、對TP-IgM陽性

10、患者,于正規(guī)驅梅治療1個月、3個月、6個月、12個月后分別采用RPR及捕獲法ELISA跟蹤監(jiān)測,進行療效評估,分析兩種方法的優(yōu)缺點。
　　 結果：
　　 1、TP-IgM檢測陽性率在二期梅毒組中最高,可達100％；其次是一期梅毒,陽性率為70.8％,結果經(jīng)卡方檢驗,差異無統(tǒng)計學意義。兩期合并的陽性率為90.4％。在潛伏期梅毒捕獲法ELISA檢測TP-IgM抗體的陽性率僅為23.3％,顯著低于早期梅毒(X2=12.42,P

11、<0.05)。10例類風濕因子陽性患者血清無1例發(fā)現(xiàn)陽性。
　　 2、一期梅毒和二期梅毒中,捕獲法ELISA 和TPPA法,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。在潛伏期梅毒TPPA、捕獲法ELISA的敏感性分別是98.8％、30.2％,捕獲法ELISA檢測的敏感性明顯低于TPPA的敏感性,差異有顯著性(X2=120.56,P<0.05)。
　　 3、經(jīng)規(guī)范驅梅治療后,一期梅毒、二期梅毒、潛伏期梅毒的捕獲法ELISA在12個

12、月后的陰轉率分別為100％、91.6％、50％。而RPR的陰轉率分別為92.8％、83.3％、46.1％。在隨訪過程中發(fā)現(xiàn),捕獲法ELISA的轉陰要早于RPR法,并且不會出現(xiàn)血清學固定。
　　 總之,捕獲法ELISA檢測TP-IgM抗體敏感性高、特異性好,是早期梅毒檢測較為理想的檢測指標。在用于梅毒的療效觀察時,轉陰時間早于RPR,也不會出現(xiàn)血清學固定,對治療終點的判斷可靠,在一定程度上要優(yōu)于RPR。
　　 結論：