外源性bFGF對坐骨神經(jīng)損傷后脊髓運動神經(jīng)元和DRG感覺神經(jīng)元CGRP變化的影響.pdf

1、目的：
　　 探討坐骨神經(jīng)損傷后，外源性堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）對坐骨神經(jīng)損傷局部、對應的背根神經(jīng)節(jié)（DRG）、脊髓后角和脊髓前角神經(jīng)元形態(tài)結構和CGRP變化的影響，為周圍神經(jīng)損傷后再生的分子機制提供形態(tài)學基礎，也為臨床治療周圍神經(jīng)損傷提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 成年雄性Wistar（78只）大鼠隨機分成正常組、陽性對照組（單側坐骨神經(jīng)損傷建立大鼠坐骨神經(jīng)損傷模型）、bFGF組（單側坐骨神經(jīng)損傷

2、，損傷后局部給bFGF，及術后隔日術側腓腸肌注射bFGF）。大鼠分別存活1d、3d、7d、14d、21d和28d，在各時間點灌注固定，取與坐骨神經(jīng)對應的L4-6脊髓節(jié)段和相應的背根神經(jīng)節(jié)（L4-6）以及損傷局部的坐骨神經(jīng)，冰凍連續(xù)切片，然后分別用免疫熒光、免疫組化及尼氏染色等方法分別觀察坐骨神經(jīng)損傷局部、DRG（L4-6）、脊髓后角（L4-6）和脊髓前角（L4-6）神經(jīng)元、神經(jīng)纖維的變化，CGRP免疫陽性細胞和纖維的變化以及CGRP的積

3、分光密度值和前角運動神經(jīng)元平均直徑的變化。
　　 結果：
　　 1、bFGF對坐骨神經(jīng)損傷后脊髓前角（L4-6）運動神經(jīng)元的影響
　　 （1）Nissl染色坐骨神經(jīng)損傷后可見術側前角（L4-6）有些外側群運動神經(jīng)元呈圓形腫脹，核周Nissl小體開始溶解，并可見明顯的胞核移位，胞質內可見有空泡變，一直持續(xù)到術后7d。術后14dNissl小體開始恢復，術后21d可見多數(shù)運動神經(jīng)元Nissl小體重新出現(xiàn)，染色較深；術后

4、28d與正常組接近。坐骨神經(jīng)損傷局部給予bFGF，bFGF能促進Nissl小體溶解后的恢復。bFGF組，損傷后1d術側前角（L4-6）外側群部分運動神經(jīng)元開始腫脹，并可見有Nissl小體溶解消失但不如陽性對照組明顯，沒見到明顯的核移位，一直持續(xù)到損傷后7d；術后14d可見大量Nissl小體再生使細胞染色較深；術后21d術側前角前外側運動神經(jīng)元的形態(tài)和平均直徑與正常組接近，對側前角運動神經(jīng)元未見明顯變化。（2）CGRP在脊髓前角（L4-6

5、）的表達變化正常組動物脊髓前角（L4-6）內可見有CGRP免疫陽性運動神經(jīng)元，免疫反應產(chǎn)物呈顆粒狀或均質狀分布于胞質中，胞核未見標記，主要見于脊髓前角的外側群神經(jīng)元，也有一些脊髓前角內側群神經(jīng)元呈CGRP陽性。坐骨神經(jīng)損傷后1d可引起L4-6前角運動神經(jīng)元CGRP的表達增加，術后7d達峰值，隨后緩慢下降，至術后21d接近正常。bFGF能促進坐骨神經(jīng)損傷后L4-6前角運動神經(jīng)元CGRP的合成。bFGF組術后1d術側前角（L4-6）外側群運

6、動神經(jīng)元呈CGRP陽性且染色較深；繼而前角（L4-6）外側群CGRP陽性細胞數(shù)目增多且染色更深，與對照組相比有明顯差異；術后14d前角（L4-6）外側群CGRP陽性細胞染色明顯變淺，到28d接近正常。
　　 2、bFGF對坐骨神經(jīng)損傷后脊髓后角CGRP陽性纖維的影響正常組脊髓后角CGRP免疫陽性纖維主要位于后角RexedⅠ和Ⅱ板層，也見于RexedⅢ和Ⅳ板層及Lissauer’s束，有許多粗細不等的CGRP陽性纖維從RexedⅠ

7、、Ⅱ板層投射到RexedⅢ和Ⅳ板層。坐骨神經(jīng)損傷后可引起脊髓后角（L4-6）CGRP陽性纖維密度降低。坐骨神經(jīng)損傷后術側脊髓后角（L4-6）CGRP陽性纖維的密度較正常組明顯下降（P<0.05），主要見于RexedⅠ和Ⅱ板層；術后7dCGRP陽性纖維密度降至最低，僅見于RexedⅠ、Ⅱ板層；隨后CGRP陽性纖維增多，但術后28dCGRP陽性纖維仍未達到正常水平。bFGF能促進坐骨神經(jīng)損傷后脊髓后角（L4-6）CGRP陽性纖維的恢復。bF

8、GF組術后1 d，CGRP陽性纖維在RexedⅠ、Ⅱ板層所占區(qū)域較正常組明顯減少（P<0.05），染色也有所下降；術后7dCGRP陽性纖維僅見于RexedⅠ、Ⅱ板層，且密度下降到最低：第14dCGRP陽性纖維明顯增多，灰質后連合處也可見大量CGRP陽性纖維；第21 dCGRP陽性纖維進一步增多，見于RexedⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ板層和灰質后連合處；術后28dCGRP陽性纖維的染色更明亮。
　　 3、bFGF對坐骨神經(jīng)損傷后背根感覺神經(jīng)

9、元的影響（1）Nissl染色坐骨神經(jīng)損傷后Nissl染色可見DRG內一些感覺神經(jīng)元Nissl小體開始溶解，DRG（L4-6）神經(jīng)元胞體腫脹，隨后有些DRG（L4-6）神經(jīng)元胞質中幾乎見不到Nissl小體；術后14d有些DRG（L4-6）神經(jīng)元Nissl小體開始恢復染色呈深藍色；至28dDRG細胞數(shù)目仍未達到正常水平。bFGF能促進坐骨神經(jīng)損傷后DRG（L4-6）中小型神經(jīng)元Nissl小體溶解恢復。bFGF組術后也有DRG（L4-6）神經(jīng)

10、元Nissl小體溶解消失；術后14d中小型細胞數(shù)目較陽性對照組明顯增加（P<0.05），且染色更深；術后21 d細胞數(shù)目與正常組接近，DRG（L4-6）神經(jīng)元呈深藍色，但bFGF對大型感覺神經(jīng)元作用不明顯。（2）DRG內CGRP的表達變化正常組動物DRG內可見大量以中小型細胞為主的CGRP免疫陽性神經(jīng)元，但也可見一些大型感覺神經(jīng)元呈CGRP陽性，CGRP呈顆粒狀均勻分布在胞漿中，細胞核未見標記，也可見到一些CGRP免疫陽性的神經(jīng)纖維。坐

11、骨神經(jīng)損傷可引起DRG（L4-6）CGRP合成減少，坐骨神經(jīng)損傷后術側DRG（L4-6）內中小型細胞CGRP積分光密度值術后1d就明顯低于正常組（P<0.05），一直到第7d降至最低，以后開始升高，但到第28d時仍明顯少于正常組；CGRP陽性的大型細胞數(shù)目術后明顯減少，其細胞數(shù)目在整個實驗過程中沒有明顯變化且一直明顯低于正常組。bFGF能促進DRG（L4-6）CGRP合成的恢復，坐骨神經(jīng)損傷后3d，術側DRG（L4-6）內中小型細胞CG

12、RP積分光密度值明顯低于正常組，第7d與陽性對照組類似都明顯低于正常組；坐骨神經(jīng)損傷后14d，CGRP的表達有所增加，至第21d與正常組接近，明顯高于陽性對照組。bFGF組術側DRG（L4-6）大型神經(jīng)元的數(shù)目和CGRP積分光密度值在整個實驗過程中均明顯低于正常組（P<0.05），bFGF組與陽性對照組相比沒有明顯差異。
　　 4、bFGF對坐骨神經(jīng)損傷局部CGRP陽性纖維的影響正常坐骨神經(jīng)未見或僅見少量CGRP陽性纖維，坐骨神

13、經(jīng)損傷后可見局部坐骨神經(jīng)內CGRP陽性纖維增加，坐骨神經(jīng)損傷后1d，陽性對照組未見CGRP陽性纖維在損傷局部表達；術后3d在損傷局部可見有大量粗細不等的斷裂的CGRP陽性纖維；第7d較第3d明顯減少；術后14d僅見有極少量的CGRP陽性纖維；第21 d和28d在損傷局部幾乎見不到CGRP陽性纖維。bFGF組術后1 d在坐骨神經(jīng)損傷局部可見大量粗細不等的斷裂的CGRP陽性纖維；術后3d，在損傷局部依然可見大量CGRP陽性纖維；術后7d與3

14、d比CGRP陽性纖維明顯減少；術后14d、21d和28d幾乎見不到CGRP陽性纖維。
　　 結論：
　　 1、坐骨神經(jīng)損傷可引起脊髓前角（L4-6）外側群運動神經(jīng)元發(fā)生Nissl小體溶解、對內側群神經(jīng)元無影響：坐骨神經(jīng)損傷也可引起DRG（L4-6）感覺神經(jīng)元Nissl小體溶解。
　　 2、坐骨神經(jīng)損傷后可引起脊髓前角（L4-6）外側群運動神經(jīng)元CGRP合成增加，DRG（L4-6）部分大中小型感覺神經(jīng)元CGRP合成