HDAC抑制劑對LS174T細胞組蛋白乙?；癆SC基因表達的作用.pdf

1、目的：基因的正常表達與調控是機體正常生長發(fā)育所必需的。日益增多的實驗表明，染色質和核小體構型的改變在基因轉錄起始過程中發(fā)揮著重要的調節(jié)作用。核心組蛋白的乙酰化和去乙?；c基因調控密切相關，目前主要由組蛋白乙酰轉移酶（HAT）和組蛋白去乙?；福℉DAC）負責組蛋白乙酰化和去乙?；?，它們是兩類功能相互拮抗的蛋白酶。組蛋白乙酰轉移酶可乙酰化組蛋白氨基末端、使核小體結構松散并激活基因轉錄；而組蛋白去乙?；妇哂邢喾吹墓δ埽种苹蜣D錄。特定基

2、因的表達與否取決于定位于靶基因啟動子上轉錄因子的乙酰化狀態(tài)，并組蛋白乙酰轉移酶和組蛋白去乙?；富钚灾g的動態(tài)平衡所調控。組蛋白去乙?；甘钦{控基因表達的關鍵蛋白酶，其功能異常與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有直接關系。通過抑制組蛋白去乙?；傅幕钚钥梢杂行е委熌[瘤。組蛋白去乙?；敢种苿╤istone deacetylase inhibitors，HDACi）能抑制HDAC的活性，并改變組蛋白或轉錄因子的乙?；癄顟B(tài)，誘導腫瘤細胞生長停滯、分化或凋

3、亡，具有明顯的抗腫瘤活性。 目前，結腸癌是高危性消化道惡性腫瘤，發(fā)病率已位列常見腫瘤第四位，僅次于肺、胃、肝癌，屬常見惡性腫瘤。2008年其發(fā)病率占上海市惡性腫瘤第二位，而且近年發(fā)病率上升趨勢十分明顯。據統(tǒng)計，我國結腸癌的發(fā)病率上升速度遠遠超過2%的國際水平，直逼5%。每年新發(fā)病例高達40萬，主要以中年人為主，其高發(fā)年齡在50歲以上。因此，對結腸癌的發(fā)病機理和臨床治療的研究受到學者的普遍關注。 ASC最先是作為一種去污劑

4、不溶解蛋白而被發(fā)現(xiàn)的，其參與視黃酸誘導的凋亡，并在細胞內形成鎢絲結構。ASC可以認為是一種腫瘤抑制基因，參與細胞凋亡的調節(jié)，炎癥胱天蛋白酶和NF-κB的激活等。許多上皮細胞和白細胞、毛囊、外周血淋巴細胞都充分表達ASC，免疫組化研究表明在嚴重的炎癥部位中性粒細胞ASC表達顯著升高。ASC表達可在基因水平進行調節(jié)，主要是通過增強子甲基化和組蛋白乙?；瘜崿F(xiàn)的。據報道，在人乳腺癌細胞中ASC會有異常甲基化或沉默。另外，在白血病、膽管癌、結腸癌

5、、前列腺癌等腫瘤中也異常表達，因此引起學術界的普遍關注。 本次實驗作者主要研究去乙?；敢种苿┒∷徕c（sodiumbutyrate，NaBu）對人結腸癌LS174T細胞中的組蛋白H3乙?；揭约皩σ职┗駻SC表達的影響，從而探討丁酸鈉在細胞凋亡誘導和結腸癌治療中的可行性。 方法：劑量組使用1、5、10mmol/L濃度的NaBu分別作用LS174T細胞24小時，時間組使用5mmol/LNaBu作用LS174T細胞12、

6、24、48、72小時。提取細胞的mRNA和總蛋白，采用RT-PCR技術檢測ASC基因表達情況，同時使用免疫印跡技術（Westernblot）檢測組蛋白H3的乙?；郊癆SC蛋白的表達情況。MTT用于檢測細胞增殖率，并使用DAPI染色和AnnexinV-FITC方法測定細胞凋亡情況。 結果：隨著NaBu作用濃度的增加組蛋白H3乙酰化程度不斷增加，使用相同濃度NaBu作用細胞不同時間時，結果顯示藥物作用時間與組蛋白的乙酰化程度呈正