兔perthes病模型中VEGF表達的實驗研究.pdf

1、目的：建立兔Perthes病模型并通過觀察Perthes病程中股骨頭局部VEGF表達的變化探討VEGF在兒童股骨頭壞死修復重建方面的作用。采用三種不同的手術方法（髓芯減壓、滑膜切除和自體松質骨移植）治療Perthes病模型，通過觀察并比較VGEF表達的變化從實驗角度上對三種手術方法的治療效果作一簡單評價。
　　方法：（1）3月齡新西蘭大白兔24只，取16只兔作為實驗組，手術切斷左側圓韌帶和股骨頭支持帶血供，建立兔Perthes病模

2、型。于術后1、2、4及8周分別處死動物，取出股骨頭，行大體觀察、X線片、組織學、VEGF免疫組織化學染色和VEGFmRNA原位雜交觀察。（2）3月齡新西蘭大白兔36只，隨機均分為4組，每組9只。A組：Perthes病模型組，B組：Perthers病模型+髓芯減壓組，C組：Perthes病模型+滑膜切除組，D組：Perthes病模型+自體松質骨植入組。手術切斷左側圓韌帶和股骨頭支持帶血供，建立兔Perthes病模型。模型制作后2周分別對B

3、、C、D組采用上述不同手術方法加以治療，各組于制模后4、6、8周（即治療后的2、4、6周）分別處死3只動物，取出股骨頭，進行觀察。
　　結果：（1）Perthes動物模型均制備成功。大體觀察：對照組各時間點股骨頭未見壞死改變。實驗組股骨頭隨時間延長逐漸粗糙、失去光澤，大小變小，甚至可見塌陷。X線片觀察：術后4、8周，實驗組股骨頭較對照組密度增高。組織學觀察：對照組各時間點HE染色均未見股骨頭壞死及修復改變。實驗組術后4周、8周可見

4、血管及肉芽組織侵入，新骨形成，參與修復。免疫組織化學：對照組股骨頭骺軟骨中，肥大區(qū)表現出較高的VEGF免疫反應性（immunoreactivity，VEGF-IR）,而增殖區(qū)VEGF-IR卻表現較低水平。術后1周，實驗組股骨頭增殖區(qū)VEGF陽性細胞率開始高于對照組，實驗組股骨頭肥大區(qū)VEGF陽性細胞率明顯減少。術后8周，實驗組股骨頭整個骺軟骨區(qū)都表現VEGF-IR，增殖區(qū)VEGF陽性細胞率較對照組明顯增加。術后8周，壞死股骨頭軟骨內骨化

5、中心修復重建，肥大區(qū)VEGF陽性細胞率較正常接近。術后1、2、4、8周，實驗組骺軟骨增殖區(qū)VEGF陽性細胞率與對照組比較均有統(tǒng)計學意義（p﹤0.01，α=0.05）；術后1、2、4周，實驗組骺軟骨肥大區(qū)VEGF陽性細胞率與對照組比較均有統(tǒng)計學意義（p﹤0.01，α=0.05）。原位雜交：結果與免疫組化相近。缺血壞死后，實驗組肥大區(qū)VEGFmRNA表達喪失，增殖區(qū)VEGFmRNA表達升高。軟骨內骨化中心修復重建后，實驗組可見新形成的肥大區(qū)

6、重新表達VEGFmRNA。（2）B、C組各時間點VEGF-IR與A組無明顯差異。D組4周可見股骨頭增殖區(qū)和肥大區(qū)VEGF-IR較A組升高；6周與4周觀察類似；8周股骨頭整個骺軟骨區(qū)都表現VEGF-IR，增殖區(qū)VEGF陽性細胞率較A組增加。股骨頭軟骨內骨化中心修復重建，肥大區(qū)VEGF陽性細胞率較A組增加。D組各時間點增殖區(qū)與肥大區(qū)VEGF陽性細胞率高于其他各組，相比有統(tǒng)計學意義（P﹤0.05，α=0.05）
　　結論：（1）采用手術

7、切斷幼兔股骨頭血供的方法制作出的Perthes病模型，在X線及病理方面均表現出與Perthes病相似的特點.(2)VEGF在壞死股骨頭骺軟骨促進血管發(fā)生，軟骨內骨化中心的修復重建方面起關鍵的調節(jié)作用，為Perthes病的治療提供了一定的基礎。（3）選取三種不同的手術方法（髓芯減壓、滑膜切除和自體松質骨移植）治療Perthes病模型，通過觀察并比較VGEF表達的變化，結果從實驗角度上表明自體松質骨移植手術治療Perthes病模型中，VEG