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1、第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文一種來源于人樹突狀細(xì)胞的CaMKIIN全長新基因的克隆及其功能的初步研究姓名:張君申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):臨床實驗診斷學(xué)指導(dǎo)教師:于嘉屏2002.6.1第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文一種來源于人樹突狀細(xì)胞的全長新基因CaMKIlN的克隆及其功能的初步研究中文摘要人類基因組計劃是生命科學(xué)領(lǐng)域的~項跨世紀(jì)工程,目的在于獲得人類的全部基因組信息,揭示人類生命的奧妙及疾病的發(fā)生發(fā)展規(guī)律,最終探索出疾病治療有效方法。隨著分子生物
2、學(xué)和計算機技術(shù)、生物信息學(xué)的發(fā)展,大規(guī)模測序已成為揭示細(xì)胞基因表達譜和發(fā)現(xiàn)新基因的有效手段(1、2)。樹突狀細(xì)胞(16endriticcells,DC)是體內(nèi)重要的專職抗原提呈細(xì)胞(APC),是機體T細(xì)胞特異免疫應(yīng)答的直接啟動者和調(diào)控者(3,4)。為了深入認(rèn)識DC的生物學(xué)功能,’闡明其生物學(xué)作用的分子機理,,本實驗室建立了樹突狀細(xì)胞eDNA基因文庫的隨機大規(guī)模測序體系(5)。本文所研究的CaMKIlN就是在隨機測序篩選人樹突狀細(xì)胞的cD
3、NA文庫時獲得的一__’__一條全長新基因。一、CaMKIlN全長新基因的克隆與組織分布分析r,根據(jù)Sanger雙脫氧鏈終止原理,利用BigDyeTermination測序試劑盒和兩臺AB“1377DNA全自動DNA測序儀,對人樹突狀細(xì)胞eDNA文庫克隆的5’端進行大規(guī)模隨機測序,將測得的基因序列與基因數(shù)據(jù)庫(Genebank/EMBL)進行比較篩選,篩選到一條全長新基因鈣離子/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶II抑制性蛋白(calcium/cal
4、modulindependentproteinkinaseIIinhibitorprotein,CaMKIIN)。該基因全長為591bp,含有240bp的完整開放性讀框(ORF),編碼含79個氨基酸的蛋白,根據(jù)Kyte—Doolitte疏水性分析和GCG軟件預(yù)測,該蛋白親水性較強,蛋白序列不包含糖基化位點,沒有特別的功能性結(jié)構(gòu)域,蛋白質(zhì)的分子量為865769Dalton,等電點為516。BLAST分析表明其與已知基因不同,蛋白水平與大鼠
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