癲癇發(fā)作小鼠模型海馬活化素βA的表達及重組人活化素A的保護作用.pdf

1、癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)常見病,臨床表現(xiàn)以慢性、自發(fā)性和反復性發(fā)作為特征.其病因及發(fā)病機制復雜,至今尚無根治性治療藥物.動物實驗已證實,一次長時或反復的癲癇發(fā)作可引起海馬等易損區(qū)神經(jīng)元壞死、反應性膠質(zhì)細胞增生及苔蘚纖維發(fā)芽等病理改變,并可能是癲癇發(fā)作得以長期維持的基礎.已經(jīng)證實,有些細胞因子和生長因子促進了以上病理變化的發(fā)生;有些則參與了對抗癇性腦損傷及癲癇發(fā)作.提示細胞因子和生長因子在癲癇后的病理機制中具有重要作用,并可能成為今后癲癇更有效治療

2、的切入點.該研究以匹魯卡品(pilocarpine,PC)誘導癲癇持續(xù)狀態(tài)(status epilepticus,SE)小鼠模型.發(fā)作行為按Rudge標準分為0-Ⅴ級,以出現(xiàn)Ⅱ級以上發(fā)作并持續(xù)1h為癲癇持續(xù)狀態(tài)(status epilpticus,SE)成模標準,成模后即刻腹腔注射安定終止發(fā)作,并以成模時定為SE后1h;無明顯抽搐或呈非持續(xù)狀態(tài)(non-status epilepticus,NSE)發(fā)作小鼠列為NSE組,亦在與SE組相當

3、時間腹腔注射安定;對照組以生理鹽水取代PC,其余處理與PC給藥鼠相同.首先應用RT-PCR方法同時觀察了成模鼠(SE)與非成模鼠(NSE)海馬組織活化素βA mRNA表達的時程變化;應用原位雜交及焦油紫尼氏染色方法分別觀察了SE小鼠海馬組織活化素βA mRNA表達的分布與海馬形態(tài)結構的病理變化;接著采用非還原型SDS-PAGE和Western blotting觀察了SE與NSE小鼠海馬組織活化素A與抑制素A蛋白表達的動態(tài)變化,并同時應用

4、RT-PCR分析了活化素受體ⅡA mRNA的表達;最后通過發(fā)作程度評分、腦電圖記錄、焦油紫尼氏染色及組織原位凋亡檢測等方法觀察了預先腦室注射重組人活化素A對PC致癇作用與海馬病理變化的影響.結論:1、PC誘導的SE能明顯上調(diào)海馬活化素βA mRNA及活化素A蛋白的表達,但對活化素受體ⅡA mRNA及抑制素A蛋白表達無明顯上調(diào)作用.2、海馬病理損害的輕重可能與活化素βA mRNA表達早晚及持續(xù)時間長短有關.3、外源性活化素A可以抑制癇樣放