利用噬菌體隨機(jī)肽庫(kù)篩選類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)多肽及診斷價(jià)值.pdf

1、研究背景:類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是一種致畸性自身免疫病,早期確診及時(shí)治療,可以提高治愈率,至少能改善患者預(yù)后.患者體內(nèi)多克隆B細(xì)胞被激活產(chǎn)生大量自身抗體,其中抗角蛋白抗體(anti-keratin antibody,AKA)對(duì)RA早期、特異的診斷價(jià)值已被公認(rèn).但目前AKA檢測(cè)所用的抗原制備比較困難,基本來(lái)源于Wister大鼠食管上皮細(xì)胞以及人的手足部胼胝,而不同種屬、不同個(gè)體之間角蛋白表達(dá)的強(qiáng)弱及種類(lèi)有所差異,使檢驗(yàn)方法不易標(biāo)準(zhǔn)化.該實(shí)驗(yàn)的目的就

2、是利用噬菌體隨機(jī)肽庫(kù),以AKA為配基篩選特異結(jié)合的抗原表位,并評(píng)價(jià)診斷價(jià)值.一方面為人工合成具有診斷價(jià)值的肽段,用于常規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)化的RA早期特異性診斷做前期應(yīng)用基礎(chǔ)研究工作;另一方面初步探討RA的致病抗原性質(zhì),為解釋RA的發(fā)病機(jī)制及實(shí)施免疫治療奠定基礎(chǔ).方法:將間接熒光法檢測(cè)AKA陽(yáng)性的20例RA患者混合血清,經(jīng)33.3﹪飽和硫酸銨鹽純化IgG,,以此多克隆抗體為配基,對(duì)噬菌體遞呈的隨機(jī)12肽庫(kù)(預(yù)先經(jīng)正常人血清吸收)進(jìn)行4輪淘篩,通過(guò)E

3、LISA檢測(cè)AKA結(jié)合陽(yáng)性噬菌體克隆,并用碘化物法提取ssDNA測(cè)序,運(yùn)用BLAST軟件進(jìn)行序列比對(duì),以尋找相應(yīng)的天然抗原信息.最后把展示不同氨基酸序列的噬菌體克隆調(diào)整至一定濃度包被酶標(biāo)反應(yīng)板,通過(guò)間接ELISA法檢測(cè)臨床RA、SLE及正常人血清標(biāo)本,進(jìn)行診斷效果評(píng)價(jià).結(jié)論:1.用RA患者血清中AKA多克隆抗體篩選噬菌體展示的隨機(jī)肽庫(kù),尋找RA相關(guān)抗原表位的方法是可行的.2.該實(shí)驗(yàn)用RA患者血清中AKA多克隆抗體篩選噬菌體隨機(jī)肽庫(kù),得到