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文檔簡介
1、目的: 研究顱腦創(chuàng)傷(TBI)后線粒體呼吸功能包括氧化磷酸化功能改變、活性氧(ROS)生成、ATP酶合成能力改變及凋亡途徑中抗凋亡基因Bcl-2、促凋亡基因Bax在mRNA水平的變化規(guī)律,并應用亞低溫治療,探討亞低溫在顱腦創(chuàng)傷后對線粒體的保護作用及分子生物學的可能機制。 方法: 以SD雄性大鼠為研究對象,制作大鼠顱腦創(chuàng)傷液壓沖擊模型,隨機分為四組: ①常溫對照組:開骨窗不致傷,保持體溫正常(36℃~37℃
2、): ②低溫對照組:開骨窗不致傷,體溫降至31℃~32℃; ③常溫TBI組:左側大腦皮層致傷,體溫維持正常; ④低溫TBI組:左側大腦皮層致傷,體溫降低至31℃-32℃。低溫維持2h。 各組分別于致傷后2h、24h、3d、7d斷頭取腦,分離腦線粒體,通過電子顯微鏡觀察線粒體超微結構,運用生物力能學方法,檢測線粒體態(tài)3、態(tài)4呼吸速率、線粒體ROS生成、ATP合成能力等指標;另一實驗為創(chuàng)傷后24h斷頭取腦,分
3、離左右側海馬和皮層,用實時定量PCR法檢測bcl-2和bax mRNA表達并觀察亞低溫6h后的保護效果。 結果: 1. 顱腦創(chuàng)傷后7d內,線粒體超微結構呈逐漸加重趨勢,可出現線粒體外膜斷裂溶解、嵴結構紊亂、空泡化、甚至溶解消失,基質分布不均勻等變化,也可見到腫脹的星形膠質細胞、固縮的神經元、染色質凝聚等凋亡早期的改變。亞低溫各組表現為神經細胞和線粒體的形態(tài)創(chuàng)傷程度較輕,形態(tài)學異常輕微 2.常溫TBI組呼吸控制比R
4、CR值在傷后2h即顯著下降,24h下降已很明顯,3天左右開始恢復,7天基本恢復至正常水平;線粒體ATP合成能力24h降至最低,3d基本恢復至正常:活性氧從傷后2h即開始升高到7天基本恢復正常水平。而亞低溫TBI組,各指標均優(yōu)于常溫TBI組,差異有統(tǒng)計學意義。 3.凋亡相關基因表達結果,bcl-2在右側海馬中的表達為:對照組<低溫TBI組<常溫TBI組,各組之間的表達有顯著性差異(p<0.05),其它部位組間無統(tǒng)計學差異;bax
5、在右側海馬表達量為:低溫TBI組<對照組<常溫TBI組,低溫TBI組和對照組無差異,常溫TBI組顯著高于對照組和亞低溫TBI組(0.05>;其它部位各組之間無統(tǒng)計學差異。 結論 1、顱腦創(chuàng)傷7d內,線粒體超微結構呈逐漸加重趨勢,可出現線粒體外膜斷裂溶解、嵴結構紊亂等改變。亞低溫各組神經細胞和線粒體的形態(tài)損傷程度較輕,形態(tài)學異常輕微,提示亞低溫可以保護線粒體結構的完整。 2、顱腦創(chuàng)傷后,線粒體的呼吸功能明顯下降,A
6、TP 合成能力降低、電子漏增加、大量活性氧生成,并導致其氧化抗氧化體系失去平衡,造成腦組織脂質過氧化損傷,亞低溫改善線粒體呼吸功能,保護腦創(chuàng)傷后線粒體氧化磷酸化耦聯(lián),抑制活性氧大量生成,提高ATP酶活性,使ATP合成量維持在相對穩(wěn)定狀態(tài),對顱腦創(chuàng)傷后線粒體具有保護作用。 3、顱腦創(chuàng)傷24h內,創(chuàng)傷周圍皮層及一些區(qū)域內凋亡相關基因表達水平發(fā)生了改變,提示創(chuàng)傷后有凋亡通路的激活;亞低溫早期治療6h,對凋亡基因的作用在顱腦創(chuàng)傷后不同部
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