MARVELD1調控內含子miR-186和miR-335表達的研究.pdf

1、MARVELD1（MARVEL domain containing1）是本課題組新近發(fā)現(xiàn)的一個抑癌基因，在多種腫瘤組織和腫瘤細胞中表達下調。課題組miRNA芯片表達譜分析發(fā)現(xiàn)，當MARVELD1表達變化時，許多miRNAs也隨其發(fā)生變化，其中hsa-miR-186和hsa-miR-335的表達存在顯著性的差異。但是，關于MARVELD1調控hsa-miR-186和hsa-miR-335的表達的研究，尚未得到驗證，而且其具體調控機制也無從

2、獲知。因此，本課題對MARVELD1調控has-miR-186和has-miR-335的表達方式進行了初步的探討。
　　在肺癌細胞中，運用實時定量逆轉錄PCR的方法發(fā)現(xiàn) MARVELD1與hsa-miR-186、hsa-miR-335的表達呈現(xiàn)明顯的正相關。在外源性表達MARVELD1的A549細胞和HepG2細胞中分析顯示，當MARVELD1過表達之后，hsa-miR-186和hsa-miR-335的表達均表現(xiàn)為上調；進一步在內

3、源性表達 MARVELD1的NCI-H520細胞和HeLa細胞中應用shRNA干擾 MARVELD1表達之后，其正相關性也獲得了證實。
　　為分析MARVELD1與hsa-miR-186和hsa-miR-335的關系，本研究首先對hsa-miR-186和hsa-miR-335進行了定位分析，結果顯示hsa-miR-186和hsa-miR-335都為內含子miRNA，其宿主基因分別為ZRANB2和MEST。對此本研究分析了MARVE

4、LD1與宿主基因的關系，通過qRT-PCR的實驗檢測宿主基因ZRANB2和MEST的表達水平，確定MARVELD1可以上調has-miR-186和has-miR-335的宿主基因的表達。為探討MARVELD1調控內含子has-miR-186和has-miR-335的機制，結合前期實驗基礎，應用染色質免疫共沉淀技術確定MARVELD1可以與宿主基因啟動子區(qū)的組蛋白H4K20單甲基化發(fā)生相互作用，進而影響宿主基因與內含子has-miR-18

5、6和has-miR-335的表達。
　　本研究進一步應用雙熒光素酶報告系統(tǒng)分析hsa-miR-186和hsa-miR-335與其預測靶基因靶向作用關系，并初步確定CHD7可能是hsa-miR-186的靶基因；CHD7和FBXL10可能是has-miR-335的靶基因。
　　綜上所述，本研究確定 MARVELD1通過下調組蛋白H4K20單甲基化，從而使得組蛋白H4K20單甲基化與宿主基因MEST和ZRANB2的啟動子DNA作用