星形膠質細胞Cdk5的表達及功能研究.pdf

1、第一部分大鼠腦星形膠質細胞體外培養(yǎng)與鑒定Cdk5在星形膠質細胞中的表達
　　目的：研究Cdk5在體外原代培養(yǎng)星形膠質細胞中的表達情況。
　　方法：取出生3天內SD大鼠皮層，減碎組織，0.125％胰酶消化，200M濾網過濾，800rpm4°8min離心，重懸細胞，置于37°細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。采用GFAP免疫熒光鑒定星形膠質細胞純度，并通過免疫熒光染色觀察Cdk5在大鼠皮層星形膠質細胞中的表達情況。
　　結果：通過參考文獻培

2、養(yǎng)、純化、鑒定星形膠質細胞，采用GFAP免疫熒光鑒定星形膠質細胞純度達到95%以上。免疫熒光染色顯示Cdk5在星形膠質細胞中表達。
　　結論： Cdk5在皮層星形膠質細胞中表達豐富。
　　第二部分星形膠質細胞體外轉染Cdk5-siRNA后對細胞增殖、攝取Glu能力及分泌BDNF的影響
　　目的：通過星形膠質細胞體外轉染Cdk5-siRNA,觀察轉染后星形膠質細胞細胞周期、增殖、谷氨酸轉運體、谷氨酸攝取能力的變化情況。<

3、br>　　方法：原代培養(yǎng)星形膠質細胞，傳代，純度鑒定>95%后給予體外轉染Cdk5-siRNA,利用懸浮轉染方法，以提高siRNA的轉染效率，轉染成功后，通過RT-PCR，Western blot篩選出最有效的Cdk5-siRNA序列，以用于后續(xù)的實驗。將實驗分為CN-siRNA,CN-siT3,OGD-siRNA,OGD-siT3實驗組，研究siRNA的轉染對細胞增殖、攝取Glu能力及分泌BDNF的影響
　　結果：通過星形膠質細

4、胞體外懸浮轉染Cdk5-siRNA后，篩選出第三個序列為沉默效率最高的序列；流式細胞術結果顯示體外轉染Cdk5-siRNA后，不論是正常條件還是糖氧剝奪的環(huán)境，星形膠質細胞進入細胞周期S期的比例增加；同時Edu結果表明，體外轉染Cdk5-siRNA后，促進星形膠質細胞增殖；星形膠質細胞谷氨酸轉運體Western blot結果顯示體外轉染Cdk5-siRNA后，轉染Cdk5-siT3組下調了谷氨酸轉運體的表達，星形膠質細胞谷氨酸攝取能力結