兒茶素對(duì)黑色素形成抑制效果初探.pdf

1、兒茶素是2-苯基苯并吡喃的衍生物，屬于黃烷醇類化合物。它大量存在于茶樹(shù)新稍中，占茶葉干重的12％-24％，是多酚類的主要成分，約為總量的70％-80％。根據(jù)結(jié)構(gòu)不同，兒茶素分為表兒茶素(EC)、表沒(méi)食子兒茶素(EGC)、表兒茶素沒(méi)食子酸酯(ECG)、表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)。由于結(jié)構(gòu)中具有連或鄰苯酚基，兒茶素具有良好的抗氧化能力，其相同物質(zhì)的量濃度的兒茶素抗氧化能力依次為L(zhǎng)-EGCG>L-EGC>L-ECG>L-EC。黑色素

2、的過(guò)速增長(zhǎng)或分布不均會(huì)造成皮膚局部過(guò)黑及色素沉著，從而產(chǎn)生雀斑、老年斑、黑斑病等病癥，影響美觀。酪氨酸酶(EC，1.14.18.1)又稱多酚氧化酶，是一種銅蛋白，其活性中心的雙核銅離子在酶催化中起重要作用，是黑色素生成的關(guān)鍵酶。隨著化妝品及藥品行業(yè)的發(fā)展，天然產(chǎn)物化妝品及藥品順應(yīng)了回歸大自然的發(fā)展潮流和人們的消費(fèi)需求，將成為化妝品及藥品開(kāi)發(fā)中的主題。
　　 本文初步探討兒茶素對(duì)黑色素形成的影響，包括兒茶素對(duì)馬鈴薯酪氨酸酶活性的抑

3、制作用；兒茶素對(duì)蘑菇酪氨酸酶活性的抑制作用；EGCG對(duì)B16小鼠黑素瘤細(xì)胞的形態(tài)、細(xì)胞增殖率、酪氨酸酶活性及黑色素生成量的影響。取得結(jié)果如下：
　　 一、采用分光光度計(jì)法測(cè)定酶液加入量、底物濃度、溫度、pH值對(duì)酶活力的影響，確定最適反應(yīng)條件。在30℃、pH6.8的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖體系中，采用酶動(dòng)力學(xué)方法研究了兒茶素對(duì)馬鈴薯酪氨酸酶的抑制效應(yīng)。結(jié)果表明：反應(yīng)最適條件為酶液加入量0.5 mL、底物濃度2 mmol/

4、L、溫度30℃、pH6.8。兒茶素對(duì)馬鈴薯酪氨酸酶有抑制作用，抑制率達(dá)到50％的兒茶素質(zhì)量濃度(IC50)約為0.27 mg/mL；Lineweaver-Burk圖顯示兒茶素對(duì)馬鈴薯酪氨酸酶的抑制作用表現(xiàn)為競(jìng)爭(zhēng)型抑制，抑制常數(shù)(K1)為0.16 mg/mL。
　　 二、在30℃，pH6.8的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖體系中，采用酶動(dòng)力學(xué)方法研究了兒茶素對(duì)蘑菇酪氨酸酶單酚酶和二酚酶的抑制效應(yīng)。結(jié)果表明，兒茶素對(duì)酪氨酸酶單酚

5、酶和二酚酶均有抑制作用，其半數(shù)抑制濃度(IC50)約分別為0.89 mg/mL和1.13 mg/mL；Lineweaver-Burk圖顯示兒茶素對(duì)二酚酶的抑制作用表現(xiàn)為競(jìng)爭(zhēng)型抑制，抑制常數(shù)(K1)為0.53mg/mL。
　　 三、采用倒置顯微鏡觀察EGCG對(duì)B16細(xì)胞形態(tài)的影響，亞甲基藍(lán)法測(cè)定EGCG對(duì)B16細(xì)胞增殖率的影響，L-多巴氧化法測(cè)定EGCG對(duì)B16細(xì)胞酪氨酸酶活力的影響，氫氧化鈉裂解法測(cè)定EGCG對(duì)B16細(xì)胞黑色素生

6、成量的影響。結(jié)果表明：EGCG作用24 h，高濃度(>60μM)組細(xì)胞胞膜融合現(xiàn)象明顯；作用72 h，高濃度組大部分細(xì)胞死亡。EGCG對(duì)B16細(xì)胞增殖率、酪氨酸酶活性、黑色素生成量均有顯著抑制，呈明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系；且EGCG抑制B16細(xì)胞增殖，IC50為33.99μM。
　　 以上研究表明，兒茶素具有抑制體外酪氨酸酶的作用，表現(xiàn)為競(jìng)爭(zhēng)型抑制；EGCG能夠顯著抑制B16細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞增殖率、酪氨酸酶活性及黑色素生成量。兒茶素對(duì)抑