RhoBTB3在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及對(duì)腎癌細(xì)胞增殖、周期和凋亡的影響.pdf

1、目的:RhoBTB家族屬于RhoGTP酶大家族的一員,與其他典型的Rho家族成員在控制細(xì)胞形態(tài)、調(diào)控細(xì)胞增殖、黏附、遷移和膜運(yùn)輸?shù)让鞔_的作用不同,RhoBTB亞族的功能雖然未能完全明確,但是一些研究已經(jīng)證實(shí)RhoBTB蛋白在致瘤過(guò)程中是通過(guò)降低或消除了某些基因的功能,從而引起蛋白功能失調(diào)導(dǎo)致細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的改變。RhoBTB的研究不僅有利于深入對(duì)Rho家族的了解,而且更有助于揭示腫瘤的發(fā)病機(jī)制和腫瘤靶向藥物的研發(fā)。本課題旨在從分子,細(xì)胞,臨床

2、病例三個(gè)層面初步探索RhoBTB3在腎透明細(xì)胞癌中的生物學(xué)效應(yīng)。
　　方法:通過(guò)定量RT-PCR方法,免疫組化以及Western印跡(Western blot法)檢測(cè)RhoBTB3在腎細(xì)胞癌和癌旁組織,以及腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系和正常腎小管上皮細(xì)胞系的表達(dá)情況。構(gòu)建 pLVX-IRES-Neo-RhoBTB3和pLVX-IRES-ZsGreen-RhoBTB3慢病毒載體,包裝成慢病毒后感染786-o和HKC細(xì)胞系。 MTS方法檢測(cè)過(guò)表

3、達(dá)和敲除腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系中RhoBTB3后的生長(zhǎng)曲線,通過(guò)劃痕試驗(yàn)和Transwell法測(cè)RhoBTB3對(duì)腎透明細(xì)胞癌的細(xì)胞侵襲和遷移的影響。通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)RhoBTB3過(guò)表達(dá)和敲除后對(duì)腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞周期和凋亡的影響。
　　結(jié)果: RT-PCR,免疫組化以及Western印跡法顯示RhoBTB3在腎透明細(xì)胞癌組織和細(xì)胞株中表達(dá)水平明顯低于相應(yīng)的癌旁組織及正常腎小管上皮細(xì)胞系(HKC)(P值均<0.05),過(guò)表達(dá)RhoBTB3