MAD2B在腎小管間質纖維化發(fā)病機理中的作用及機制.pdf

1、目的：通過體內實驗來探討MAD2B在腎小管間質纖維化過程中的作用。
　　方法：在體內實驗中探討MAD2B在腎間質纖維化的表達情況，應用單側輸尿管梗阻模型，將小鼠分為4組（n=5）：假手術組、1天末模型組、3天末模型組、7天末模型組。用Masson染色以及免疫組化檢測假手術組和UUO不同時間點（1d，3d，7d）α-SMA、FN的表達部位以及表達量來驗證造模成功與否；通過western blot檢測假手術組和UUO不同時間點（1d，

2、3d，7d）MAD2B蛋白表達情況；用免疫組化檢測假手術組和UUO不同時間點（1d，3d，7d）Cdh1和MAD2B蛋白的表達情況；通過western blot檢測假手術組和UUO不同時間點（3d，7d）APC/C底物cyclinB1、snon、skp2的表達量；選擇造模第7天作為時間點，采用慢病毒轉染shRNA抑制MAD2B基因表達，將轉染后的小鼠分為4組（n=5）：Sham+ScrambledsRNA組、Sham+MAD2B-shR

3、NA組、UUO+Scrambled sRNA組、UUO+MAD2B-shRNA組。做冰凍切片直接觀察轉染效率。用western blot檢測MAD2B抑制后的表達，并檢測APC/C復合物調節(jié)分子Cdh1，底物cyclinB1、snon、skp2的表達。用免疫組化的方法檢測α-SMA、FN的表達。用Masson染色評價腎臟纖維化的程度。
　　結果：用Masson染色結果以及用免疫組化的方法檢測α-SMA、FN的表達驗證UUO模型造模

4、成功；MAD2B在腎纖維化模型中隨著造模時間的增加表達上調，在UUO手術后第7天時表達最高，并且導致了APC/C通路分子表達變化，Cdh1、snon表達下調；而skp2、cyclinB1表達上調；采用慢病毒轉染動物模型敲低MAD2B后，APC/C調節(jié)分子Cdh1表達上調，相關底物cyclinB1表達下調，腎間質纖維化相關蛋白α-SMA、FN表達減少，腎臟纖維化程度減輕。
　　結論：在UUO模型中MAD2B表達升高，可導致APC/C