胰腺癌候選免疫原性膜抗原——Prohibitin生物學功能研究及預后分析.pdf

1、背景與目的：
　　 胰腺癌是消化系統(tǒng)惡性程度極高、預后極差的腫瘤，其發(fā)生發(fā)展機制尚未闡明。本實驗室前期在胰腺癌患者血清中篩選出Prohibitin可能為胰腺癌相關免疫原性膜抗原。Prohibitin廣泛分布于各種真核細胞中，其氨基酸結構保守，既發(fā)揮分子伴侶作用，也具有負性轉錄調控作用。其對細胞代謝、生長、分化、衰老以及凋亡等諸多方面發(fā)揮著重要的調控作用，與某些腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關。本研究擬探討Prohibitin同胰腺癌生物學行

2、為以及化療耐藥之間的關系，以及Prohibitin蛋白表達水平與胰腺癌臨床病理特點及預后之間的關系。
　　 材料與方法：
　　 應用Real-time PCR和Westem blot檢測Prohibitin mRNA及蛋自在9株胰腺癌細胞株中的表達水平。選用胰腺癌細胞株AsPC-1和MIAPaCa-2作為實驗研究對象，應用siRNA干擾技術使prohibitin(phb)基因表達沉寂，觀察干預前后胰腺癌細胞增殖、遷移和侵

3、襲能力的變化，以及對于吉西他濱和5-FU化療敏感性的變化。通過Annexin V/PI雙染法檢測凋亡、Caspase-3活性測定以及Westem blot檢測凋亡通路相關調控蛋白PARP、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Caspase-9和Bcl-2在phb基因沉默后吉西他濱作用時表達水平的變化。收集北京協(xié)和醫(yī)院31例胰腺患者血清標本和31健康志愿者的血清標本，檢測血清中Prohibitin蛋白的含量；同時收集6

4、6例胰腺導管腺癌標本，采用免疫組織化學方法檢測Prohibitin蛋白在癌組織與癌旁組織中的表達情況并評價其與患者臨床病理以及預后指標的相關性。
　　 結果 ：
　　 Prohibitin mRNA和蛋白在9株胰腺癌細胞中均明確表達。phb基因沉默后胰腺癌細胞增殖減弱，遷移和侵襲能力下降；phb基因沉默后胰腺癌細胞對吉西他濱和5-FU化療敏感性降低，促進耐藥；phb基因沉默后吉西他濱作用時細胞凋亡率明顯降低，Caspas

5、e-3活性明顯降低，促凋亡蛋白PARP、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Caspase-9表達水平顯著下調，抑凋亡蛋白Bcl-2表達水平顯著上調，差異都具有統(tǒng)計學意義。胰腺癌患者血清中Prohibitin蛋白含量顯著增高(P＜0.001)。Prohibitin蛋白在胰腺癌腫瘤組織中呈高表達(P=0.009)，并與遠處轉移相關。Kaplan-Meier生存分析顯示Prohibitin蛋白高表達提示患者預后不良，單因