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1、目的:通過正交實(shí)驗(yàn),確定芪歸扶正顆粒劑最佳的提取工藝和成型工藝;建立以黃芪甲苷為指標(biāo)的含量測(cè)定方法;初步考察其對(duì)小鼠造血、免疫功能和對(duì)S-180荷瘤小鼠生存時(shí)間和生存狀態(tài)的影響。
方法:1、優(yōu)化水提取工藝:設(shè)計(jì)L9(34)正交實(shí)驗(yàn),以提取液中總糖的含量為檢測(cè)指標(biāo),綜合考察浸泡時(shí)間、加水量、提取時(shí)間和提取次數(shù)四個(gè)因素對(duì)總糖提取率的影響,最終確定最佳的水提取工藝。2、優(yōu)化醇提取工藝:設(shè)計(jì)L9(34)正交實(shí)驗(yàn),以提取液中的黃芪甲
2、苷含量為檢測(cè)指標(biāo),綜合考察乙醇濃度、乙醇加入量、提取時(shí)間和提取次數(shù)四個(gè)因素對(duì)提取率的影響,最終確定最佳的醇提取工藝。3、確定最佳的成型工藝:考察吸收劑糊精的用量及潤(rùn)濕劑乙醇的最佳濃度。4、建立含量測(cè)定方法:建立以黃芪甲苷為指標(biāo)的含量測(cè)定方法。5、進(jìn)行藥效學(xué)研究:通過環(huán)磷酰胺造成小鼠免疫功能低下模型,考察芪歸扶正顆粒劑對(duì)血液中白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白及血小板的影響;通過碳廓清實(shí)驗(yàn)考察其對(duì)小鼠單核巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響;通過PHA(植物血凝
3、素)誘導(dǎo)的體內(nèi)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)考察其對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能的影響;用ratanti-mouse Interleukin2試劑盒測(cè)定免疫功能低下小鼠血漿中白細(xì)胞介素-2(IL-2)的含量,從分子水平探討芪歸扶正顆粒劑對(duì)機(jī)體免疫功能的影響;觀察芪歸扶正顆粒劑對(duì)S-180荷瘤小鼠生存時(shí)間和生存狀態(tài)的影響,以考察其對(duì)腫瘤的作用。
結(jié)果:1、水提取工藝的優(yōu)化:芪歸扶正顆粒劑的水提最佳工藝為A283C3D3,即在藥材中加入12倍量的水,浸
4、泡1小時(shí),回流提取3次,每次提取2小時(shí)。2、醇提取工藝的優(yōu)化:醇提最佳工藝為A2B1C2D3,即在藥材中加入70%乙醇溶液,6倍加液量,回流提取3次,每次提取2小時(shí)。3、成型工藝的優(yōu)化:糊精作為吸收劑的用量為18.77%,以87.5%乙醇作為潤(rùn)濕劑制粒效果最佳。4、含量測(cè)定方法:以HPLC法測(cè)定了芪歸扶正顆粒劑中黃芪甲苷的含量。5、藥效學(xué)研究:芪歸扶正顆粒劑能夠提高免疫功能低下小鼠的白細(xì)胞水平,增強(qiáng)其單核巨噬細(xì)胞吞噬能力,增強(qiáng)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)
5、化能力,對(duì)免疫功能低下小鼠的血漿白細(xì)胞介素-2也有一定的提高作用;能夠延長(zhǎng)S-180腹水瘤小鼠的生存時(shí)間,改善其生存狀態(tài)。
結(jié)論:芪歸扶正顆粒劑由湯劑改變?yōu)轭w粒劑的提取和成型工藝成本低廉,易于操作,適合工廠規(guī)?;a(chǎn);含量測(cè)定方法的建立,確保了對(duì)芪歸扶正顆粒劑質(zhì)量的可控性,為芪歸扶正顆粒劑的藥效提供了保障;藥效學(xué)研究證明湯劑改變?yōu)轭w粒劑后,仍具有提高血液中白細(xì)胞水平、增強(qiáng)機(jī)體免疫的作用。同時(shí),具有使用、貯藏、攜帶方便,服用
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