GrB和PFP在胃癌中表達及意義與局部免疫狀態(tài)的初步研究.pdf

1、研究背景和目的:胃癌是消化道最常見的惡性腫瘤,其發(fā)生是一個復雜的過程。一般認為,胃黏膜上皮經(jīng)慢性萎縮性胃炎、腸上皮化生和非典型性增生之后,可能會發(fā)展為胃癌。當腫瘤發(fā)生后,機體可通過免疫效應機制發(fā)揮抗腫瘤作用。近年來認為,在抗腫瘤免疫效應中,細胞免疫是抗腫瘤免疫的主力,體液免疫通常起協(xié)同作用。細胞免疫的效應細胞主要為活化的細胞毒T淋巴細胞(Cytotoxic Tlymphocytes,CTL)和自然殺傷細胞(Nature killer c

2、ell,NK),它們可通過穿孔素(perforin,PFP)/顆粒酶B(granzymeB,GrB)介導的細胞毒途徑和Fas/Fas-L介導的細胞凋亡途徑發(fā)揮作用,其中PFP/GrB介導的細胞毒作用是主要途徑。GrB是CTL和NK細胞中含量最豐富、發(fā)揮細胞毒作用最快且有效的顆粒酶,是主要的效應分子。PFP是發(fā)揮細胞毒作用的另一特征性標志物,它與GrB共存于活化的CTL和NK細胞胞漿中。GrB與PFP主要表達于CD4+CTL、CD8+CT

3、L及NK細胞,其中以CD8+CTL和NK細胞為主,故在腫瘤組織中浸潤的GrB+和PFP+的淋巴細胞密度直接反映腫瘤局部免疫狀態(tài).
　　 近年來國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn),GrB和PFP不僅存在于CTL和NK細胞中,而且也存在于其它一些細胞中,尤其值得關注的是在腫瘤細胞中發(fā)現(xiàn)GrB和PFP的表達。目前研究顯示,它們不僅可在一些淋巴腫瘤細胞中表達,而且也發(fā)現(xiàn)GrB、PFP在人體乳腺癌和肺癌等上皮源性癌細胞中的表達。我們先前研究發(fā)現(xiàn),GrB在胃良

4、惡性組織中也有表達,并認為胃癌組織中表達的GrB可能發(fā)揮其細胞毒作用抑制周圍的局部免疫反應,但GrB+的胃癌細胞是否具有細胞毒淋巴細胞(CLs)的生物學特征尚不清楚。
　　 胃黏膜是由多種不同結(jié)構和功能的細胞所構成的一種十分復雜的上皮組織,由此發(fā)生的惡性腫瘤-胃癌是如何發(fā)生的?起源于哪一種細胞?起始部位何在?發(fā)生發(fā)展過程如何?這些問題的解決有賴于進行胃癌組織發(fā)生的研究。近年有研究顯示,胃癌細胞還可能起源于骨髓源性細胞(BMDC)

5、,提出了胃癌細胞非上皮起源的新學說。
　　 在我們先前研究基礎上,本研究旨在探討GrB和PFP在胃癌中的表達情況及意義與局部免疫狀態(tài)的關系。全文分兩部分:在第一部分,主要探討PFP在良惡性胃上皮細胞是否亦有表達?其表達是否與GrB有共表達關系?旨在揭示GrB+胃癌細胞是否具有細胞毒淋巴細胞樣的生物學表型特征。從而可能為胃癌細胞的非上皮起源學說提供了強力佐證,為進一步研究GrB+胃癌生物學功能奠定基礎。在第二部分,主要探討在胃癌患

6、者其胃切緣-癌旁-癌組織中浸潤的PFP+TIL細胞密度的變化,從而揭示胃癌局部免疫狀態(tài)的變化及其意義。方法:選取術前未進行放療、化療、免疫治療及其它治療,經(jīng)外科行胃癌根治性或姑息性切除術后患者標本35例,收集其相應完整的臨床及病理學資料。采用免疫組織化學PV法同步檢測胃癌患者的切緣組織-癌旁組織-癌組織-相應轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織中GrB與PFP蛋白的表達情況以及腫瘤周圍浸潤PFP+TIL細胞數(shù)量及分布情況并結(jié)合臨床病理進行分析。結(jié)果:第一部分

7、:1、GrB蛋白在胃切緣組織、癌旁組織、癌組織中均有表達,陽性率分別是40.00％(14/35),42.86％(15/35),48.57％(17/35),相互之間差異無顯著意義(P>0.05)；同步檢測PFP,發(fā)現(xiàn)在所有患者的胃切緣、癌旁、癌組織中PFP均為陰性表達,僅見胃不同部位組織間質(zhì)中PFP+TIL細胞有散在表達可作陽性內(nèi)對照；同時發(fā)現(xiàn)GrB+與GrB-胃癌組織對應胃切緣組織、癌旁組織GrB表達率均有顯著性差異；2、GrB在胃癌組

8、織中的表達水平與患者的年齡、組織分化程度、浸潤深度及TNM分期病理因素無顯著差異,(P>0.05)；而與患者的性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移兩組間的差異顯著,(P<0.05)。3、GrB在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶胃癌細胞中也有表達,35例胃癌患者中共有23例淋巴轉(zhuǎn)移,GrB在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶胃癌中表達率為52.2％(12/23)。而相應的原發(fā)癌灶中GrB表達率為26.1％(6/23),兩者之間無顯著差異,(P>0.05)。第二部分:1、在胃切緣組織、癌旁組織、癌組織

9、中均可看到不同程度浸潤于組織間質(zhì)中的PFP+TIL細胞。切緣與癌旁比較(P<0.01)；癌組織與癌旁比較(P<0.01)；切緣與癌組織比較(P>0.05)。2、胃癌組織周圍浸潤的PFP+TIL細胞密度在浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有顯著性差異,(P<0.05)。結(jié)論:根據(jù)目前實驗結(jié)果GrB陽性胃癌細胞不與PFP共表達,即GrB在良惡性胃上皮細胞表達不依賴于PFP,未能證實GrB+胃癌細胞具有淋巴毒細胞表型,對于胃癌非上皮起源學說(B