變形鏈球菌表面蛋白P1的提取純化.pdf

1、[目的]:
　　齲病是最常見的人類感染性疾病之一。變形鏈球菌是人類齲病的主要致病菌之一，其在牙面黏附定植是致齲的首要條件。變形鏈球菌菌體胞壁上的表面蛋白P1與細(xì)菌黏附密切相關(guān)，是其主要黏結(jié)素。本課題旨在摸索高效率、條件溫和的方法分離純化帶有活性的變形鏈球菌表面蛋白P1，為進(jìn)一步分析表面蛋白P1與唾液獲得性膜特異黏附的分子機(jī)制，進(jìn)行黏結(jié)素的黏附功能區(qū)定位奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　[方法]
　　1.硫酸銨分級(jí)沉淀法提取非變性變形

2、鏈球菌表面蛋白P1粗提物，運(yùn)用SDS-PAGE分析粗提蛋白;
　　2.用AKTA explorer100快速純化工藝開拓系統(tǒng)，采用陰離子交換原理分離純化非變性變形鏈球菌表面蛋白P1，運(yùn)用UNICORN5.11軟件及SDS-PAGE分析結(jié)果。
　　[結(jié)果]
　　1.經(jīng)硫酸銨分級(jí)沉淀法初步分離出的表面蛋白P1粗提物用SDS-PAGE電泳結(jié)果為可見分子量約185kD的蛋白條帶，同時(shí)亦可見數(shù)條其余分子量的非目的條帶，其蛋白含量

3、約為0.146mg/ml;
　　2.強(qiáng)陰離子交換層析分離純化出表面蛋白P1，SDS-PAGE電泳結(jié)果為可見分子量約185kD的單一蛋白條帶。
　　[結(jié)論]
　　可運(yùn)用硫酸銨分級(jí)鹽析沉淀粗提變形鏈球菌表面蛋白，用Sepharose XL填料（強(qiáng)陰離子交換劑）在pH7.5下，5％，10％，40％，100％NaCl溶液固定梯度洗脫、上樣量為40ml時(shí)可獲得較高得率的純化P1蛋白。從變形鏈球菌培養(yǎng)上清液中分離出較純的表面蛋白P