甲型流感病毒核蛋白融合基因的構建與表達以及siRNA抑制作用的研究.pdf

1、目的：甲型流感病毒核蛋白NP融合基因的構建及表達；檢測特異siRNA在MDCK細胞中對NP融合基因表達的抑制作用。
　　 方法：PCR擴增甲型流感病毒核蛋白NP基因片段，運用三種不同的方法構建NP與綠色熒光蛋白的融合基因pEGFP-N1-NP，獲取成功構建含綠色熒光蛋白融合基因的方法；利用脂質體介導將融合基因表達質粒載體pEGFP-N1-NP導入MDCK細胞；設計并合成針對甲型流感病毒多種亞型的特異性siRNA，并與融合基因pE

2、GFP-N1-NP共轉染MDCK細胞，通過熒光顯微鏡、免疫熒光、Western blot等方法檢測NP基因的表達以及siRNA對NP基因表達的抑制作用，篩選出對NP基因表達能有效抑制的siRNA。
　　 結果：通過構建甲型流感病毒核蛋白NP融合基因三種方法的比較研究，成功獲取了構建含綠色熒光蛋白融合基因的方法；熒光顯微鏡、免疫熒光、Western blot等方法檢測NP基因在MDCK細胞中的表達，所設計的3對特異siRNA均能有