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文檔簡介
1、目的:研究油酸在非酒精性脂肪變性肝細胞模型中誘導(dǎo)水甘油通道蛋白(aquaglyceroporins) AQP3、AQP9表達改變的相關(guān)信號分子機制。
方法:采用不同濃度油酸干預(yù)人肝癌HepG2細胞構(gòu)建非酒精性脂肪變性肝細胞模型,油紅O染色及OD值測定分析肝細胞脂肪變性程度,實時熒光定量PCR與Western blot方法確定油酸誘導(dǎo)AQP3、AQP9表達變化的最佳濃度,然后以油酸最佳干預(yù)濃度以及不同信號通路抑制劑分別聯(lián)合誘
2、導(dǎo)HepG2細胞,以常規(guī)培養(yǎng)的HepG2細胞為對照組,利用qRT-PCR和Western blot方法檢測分析參與油酸鈉誘導(dǎo)AQP3、AQP9表達水平改變的相關(guān)信號分子機制。
結(jié)果:油紅O染色及其OD值測定結(jié)果顯示隨著油酸誘導(dǎo)濃度的升高(0-500μmol/L),脂肪變性程度逐漸加重,有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。qRT-PCR和Western blot方法檢測結(jié)果表明油酸的刺激可以下調(diào)AQP3的表達量而上調(diào)AQP9的
3、表達,其作用均呈劑量依賴性,確定500μmol/L作為油酸干預(yù)的最佳刺激濃度。qRT-PCR檢測不同信號通路抑制劑干預(yù)對油酸誘導(dǎo)AQPs表達改變的結(jié)果表明,油酸對AQP3 mRNA的抑制作用僅能被SB203580逆轉(zhuǎn);對AQP9 mRNA而言,LY294004的干預(yù)能夠增強油酸的刺激作用,SB203580則能抑制其表達上調(diào);PD98059和SP600125的干預(yù)則無明顯作用。AQP3、AQP9蛋白表達的改變同基因水平基本一致。進一步研究
4、表明,油酸的刺激作用可使Akt磷酸化水平下降而p38磷酸化水平升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。p-ERK1/2和p-JNK水平無明顯改變。
結(jié)論:油酸可呈劑量依賴方式誘導(dǎo)AQP3表達量下降而AQP9表達量升高,其中PI3K/Akt信號通路的抑制參與了油酸對AQP3表達量的下調(diào),而AQP9的調(diào)節(jié)還涉及了p38 MAPK途徑的激活,表明油酸在非酒精性脂肪變性肝細胞模型中是通過不同信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)節(jié)AQP3和AQP9的表達
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