褪黑素對重癥急性胰腺炎大鼠凋亡蛋白Smac-DIABLO、XIAP mRNA表達影響的實驗研究.pdf

1、目的：探討褪黑素(melatonin,MT)對重癥急性胰腺炎(severe acutepancreatitis,SAP)大鼠胰腺組織中Smac/DIABLO、XIAP mRNA表達的影響及可能機制。
　　 方法：
　　 1.健康SD雄性大鼠54只,質(zhì)量200-250g,將大鼠按隨機數(shù)字表進行完全隨機化的方法隨機分成3組:假手術(shù)組(sham operation,SO),重癥急性胰腺炎(severeacute pancrea

2、titis,SAP)組,褪黑素干預SAP組(MT pretreated,MS)。每組各18只,每組分3h、6h、12h三個時點,每時點6只。
　　 2.采用逆行胰膽管注射法。SO組僅翻動胰腺數(shù)次,SAP勻速注入3.5％脫氧膽酸鈉(0.1ml/100g),MS組在誘導SAP前30min經(jīng)腹腔注射MT(50mg/kg,0·1ml/100g),常規(guī)關腹,動物造模后于背部皮下分點注射2.0mL無菌生理鹽水,補充水分。
　　 3.

3、各組大鼠分別于術(shù)后第3h、6h、12h(各組各時間點6只)經(jīng)下腔靜脈取血5-8ml,離心、留取上清液,并-20℃保存。迅速取出胰腺組織平均分為兩部分:一部分置于去RNA酶凍存管中,并于-80℃保存；一部分經(jīng)4％的多聚甲醛固定。心臟穿刺取血處死大鼠。SAP組大鼠在造模后第6-12h之間,死亡2只。
　　 4.血清淀粉酶檢測,常規(guī)病理學觀察胰腺組織損傷,缺口末端標記技術(shù)(TUNEL)法檢測胰腺組織細胞凋亡,實時定量(Real-Tim

4、e)PCR分析胰腺組織中Smac/DIABLO、XIAP mRNA的表達。
　　 5.統(tǒng)計學方法采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析,所有數(shù)據(jù)以(x)±s表示,進行正態(tài)性檢驗和方差齊性分析,采用t檢驗、完全隨機設計單因素方差分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果：成功建立大鼠SAP模型。
　　 1.血清淀粉酶
　　 同SO組比較,SAP組和MS組血清淀粉酶增高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)

5、,證明模型制作成功；MS組血清淀粉酶各時點較SAP組相應時點均下降,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 2.胰腺組織病理
　　 同SO組相比,MS組和SAP組胰腺組織均顯示不同程度的病理損害。同SAP組相比,MS組胰腺組織病理損傷較SAP組相應時點減輕。
　　 3.胰腺組織細胞凋亡
　　 同SO組相比,MS組和SAP組細胞凋亡指數(shù)增加,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；同SAP組相比,MS組各時點細

6、胞凋亡指數(shù)均較SAP組降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 4.Smac/DIABLO和XIAP mRNA表達
　　 SAP組胰腺組織中Smac/DIABLO mRNA表達逐漸下降。與SAP組相比,MS組Smac/DIABLO mRNA表達下調(diào)(P<0.05)。
　　 SAP組中XIAP mRNA表達逐漸升高。與SAP組相比,MS組XIAP mRNA表達上調(diào)(P<0.05)。
　　 結(jié)論： MT