蝎毒多肽提取物對小鼠Lewis肺癌免疫逃逸的影響.pdf

1、背景:肺癌患者體內(nèi)存在廣泛的免疫逃逸現(xiàn)象,這一事實(shí)已在鼠腫瘤模型及癌癥患者得到確切證實(shí)。目前所知肺癌免疫逃逸的機(jī)制很多,其中樹突狀細(xì)胞(DC)的分化成熟異常導(dǎo)致的功能障礙是腫瘤免疫逃逸的主要機(jī)制之一,肺癌微環(huán)境已成為造成DC功能不足的一個重要因素。腫瘤免疫的基礎(chǔ)研究表明,一些腫瘤細(xì)胞還能分泌某些免疫抑制因子抑制腫瘤患者體內(nèi)樹突狀細(xì)胞(Dendriticcell.DC)的分化成熟及機(jī)體的免疫功能,使腫瘤細(xì)胞逃脫機(jī)體的免疫監(jiān)視而無限生長。腫

2、瘤逃逸是決定腫瘤生長、進(jìn)展和轉(zhuǎn)移的主要生物機(jī)制。因此,通過抑制腫瘤逃逸相關(guān)因子,干預(yù)腫瘤逃逸,可能為中醫(yī)藥治療腫瘤的有效作用靶點(diǎn)之一。蝎毒多肽提取物(polypeptide extract from scorpion venom,PESV)是本實(shí)驗(yàn)室從東亞鉗蝎蝎毒中提取分離的抗腫瘤有效成分,為含50～60個氨基酸的多肽混合物,是一種耐熱、·pH穩(wěn)定的蛋白質(zhì),相對分子質(zhì)量為(6～7)×103,具有多種生物活性。研究證實(shí),PESV在體內(nèi)外具

3、有顯著的抗腫瘤作用,可改善荷瘤機(jī)體免疫功能抑制狀態(tài),并能與放化療聯(lián)合產(chǎn)生良好的協(xié)同抗腫瘤效應(yīng),但其作用機(jī)制尚未完全闡明。本實(shí)驗(yàn)通過觀察PESV對Lewis肺癌免疫逃逸相關(guān)因子的影響,探討PESV對腫瘤免疫逃逸的干預(yù)作用。
　　 目的：
　　 觀察蝎毒多肽提取物(PESV)對腫瘤微環(huán)境中免疫抑制因子VEGF、TGF-β1和IL-10的表達(dá)及對樹突狀細(xì)胞(DC)分化成熟的影響,改善非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者的免疫耐受狀態(tài)

4、,啟動并維持DC誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答,并進(jìn)一步揭示PESV抗腫瘤的作用機(jī)理,為非小細(xì)胞肺癌的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),從而將PESV與傳統(tǒng)的化療藥物及以DC為基礎(chǔ)的免疫治療相結(jié)合。
　　 方法：
　　 1.建立Lewis肺癌皮下種植瘤模型,將動物隨機(jī)分為荷瘤對照組、PESV小劑量組和PESV大劑量組。檢測腫瘤體積并計算抑瘤率,觀察PESV對腫瘤生長的抑制作用。
　　 2.常規(guī)HE染色,光鏡觀察瘤組織病理變化。
　　 3

5、.免疫組化法和ELISA法分別檢測瘤組織及血清中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)和白介素10(IL-10)的表達(dá)。
　　 4.免疫組化法和流式細(xì)胞儀分別檢測肺癌組織中浸潤的DC表面共刺激分子CD80、CD86的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.PESV對Lewis肺癌生長的影響
　　 與荷瘤對照組相比,PESV對腫瘤體積的抑制作用較明顯,PESV組小鼠的瘤重明顯降低,差異顯著(

6、P＜0.01)。PESV大、小劑量組之間無差別,抑瘤率分別為56.60％、54.51％。
　　 2.PESV對瘤組織中免疫抑制因子VEGF、TGF-β1和IL-10表達(dá)的影響免疫組織化學(xué)染色顯示,VEGF、TGF-β1和IL-10陽性產(chǎn)物主要定位于腫瘤細(xì)胞胞漿內(nèi),經(jīng)半定量圖像分析,PESV各組瘤組織VEGF、’TGF-口1和IL.10的表達(dá)水平均明顯低于對照組(P＜0.05)。
　　 3.PESV對Lewis肺癌小鼠血清

7、中VEGF、TGF-β1和IL-10含量的影響
　　 PESV各組荷瘤小鼠血清中VEGF、TGF-β1和IL-10的含量均明顯低于荷瘤對照組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4.PESV對瘤組織中DC表面分子CD80、CD86表達(dá)的影響
　　 免疫組織化學(xué)染色顯示,CD80、CD86的陽性表達(dá)主要見于胞膜及胞漿,經(jīng)半定量圖像分析,PESV各組瘤組織中CD80、CD86的表達(dá)水平均明顯高于對照組(P＜0

8、.05)。
　　 5.流式細(xì)胞儀檢測CD80、CD86的表達(dá)
　　 PESV可使DC表面共刺激分子CD80、CD86的表達(dá)增加。與荷瘤對照組相比,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.PESV可干預(yù)肺癌免疫逃逸,其機(jī)制可能與減少腫瘤微環(huán)境中VEGF、TGF-β1和IL-10的表達(dá),增加DC共刺激分子CD80、CD86的表達(dá)有關(guān)。
　　 2.PESV可抑制Lewis肺癌的生長