小鼠脂肪源間充質(zhì)干細胞在體外對造血功能影響的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討小鼠脂肪源間充質(zhì)干細胞對造血干/祖細胞體外擴增的影響并對其機制進行初步研究。
  方法:無菌條件下獲取C57BL/6小鼠的脂肪源干細胞(ADSCs),培養(yǎng)至 P3代:
 ?、偌毎螒B(tài)學分析;
 ?、诹魇郊毎g檢測細胞表面免疫表型;
 ?、壑驹锤杉毎ㄏ虺晒恰⒊芍毎T導。
  將小鼠成纖維細胞、骨髓間充質(zhì)干細胞、成骨誘導前后的脂肪源干細胞經(jīng)絲裂霉素C處理后作為滋養(yǎng)層,以骨髓單個核細胞(BMNCs

2、)作為長期培養(yǎng)起始細胞(LTC-IC),對其進行35天長期體外共培養(yǎng),將本實驗分4組:A組:BMNCs加小鼠成纖維細胞,B組:BMNCs加骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs),C組:BMNCs加ADSCs,D組:BMNCs加成骨誘導后的脂肪源干細胞(osteo-ADSCs);分別于0 d、14 d、28 d、35 d行甲基纖維素14 d短期處理分析造血干/祖細胞集落增殖狀態(tài);同時應用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測上清液中的基質(zhì)細胞衍生因子-

3、1(SDF-1)、N-鈣黏素(N-cadherin)、β-連環(huán)蛋白(β-catenin)、Jagged1蛋白(JAG1)的表達情況。
  結果:
  1. ADSCs的生物學分析:ADSCs在體外呈梭形生長并可穩(wěn)定傳代;成骨、成脂誘導均為陽性;流式結果分析:CD29高表達(95.37±0.95)%;CD34低表達(8.7±0.4)%。
  2.細胞體外二維共培養(yǎng)后對造血干/祖細胞(HSPCs)擴增的影響:
 ?、?/p>

4、不同時間點造血干/祖細胞(HSPCs)形成的集落數(shù)不同,且成骨誘導后的脂肪源干細胞更具有造血支持作用;
 ?、?SDF-1、N-cadherin、β-catenin、JAG1的表達情況在不同時間點不同,SDF-1、β-catenin的表達結果顯示:C、D組表達明顯高于A、B兩組(P<0.05);且C組與D組比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05);而N-cadherin、JAG1在各組間比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
  結論:

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