基底剛度對創(chuàng)面愈合相關細胞的影響.pdf

1、在創(chuàng)面愈合階段，表皮細胞首先遷移至受創(chuàng)真皮，內皮細胞形成新的血管，并用新生毛細血管交聯(lián)成纖維細胞和巨噬細胞代替由纖維蛋白基質組成的肉芽組織。接著表皮細胞、內皮細胞和成纖維細胞開始增殖和成熟，并最終恢復上皮屏障功能。在創(chuàng)面愈合過程中，創(chuàng)面的剛度發(fā)生明顯的改變，而力學變化對細胞增殖、遷移和分化有著調控作用。因此，基底剛度的變化對創(chuàng)面愈合相關細胞的影響值得探討。本文采用人表皮細胞（HACAT）、人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）和成纖維細胞三種創(chuàng)

2、面愈合相關細胞，以不同剛度的硅膠作為基底，將其接種在硅膠基底上，探索不同剛度基底對創(chuàng)面愈合相關細胞的影響，探索人表皮細胞、內皮細胞與成纖維細胞對外部力學刺激的應激反應，以期為闡明創(chuàng)面愈合機制，促進創(chuàng)面愈合提供可靠的依據(jù)和參考意見。
　　本文主要的研究內容和結果為：
　?。?）了解創(chuàng)面愈合過程中剛度的變化，采用不同濃度的硅膠配制不同剛度的硅膠基底以模擬其愈合過程中的剛度變化，觀察硅膠基底表面形貌。結果顯示以16kPa、20kP

3、a、200kPa來分別模擬正常皮膚的剛度、創(chuàng)面愈合第7天肉芽組織的剛度、創(chuàng)面愈合后期的剛度。掃描電鏡觀察到不同濃度硅膠基底并未引起表面形貌的差別。
　?。?）將表皮細胞、內皮細胞和成纖維細胞接種在三種不同剛度的硅膠基底上。通過細胞生長曲線、MTT法和細胞周期檢測其增殖情況；用細胞劃痕法進行表皮細胞、內皮細胞和成纖維細胞遷移率的測定。發(fā)現(xiàn)在剛度高的基底上表皮細胞、內皮細胞和成纖維細胞增殖速度更快，且三種細胞的遷移率遠遠高于低剛度基底

4、上的細胞。同時發(fā)現(xiàn)表皮細胞與成纖維細胞對于基底剛度的變化敏感，而內皮細胞雖然受基底剛度的影響，但其敏感程度不如表皮細胞與成纖維細胞。
　?。?）應用構建好的整合素β1小RNA干擾載體轉染表皮細胞與成纖維細胞，通過瞬時轉染，用Western blot檢測轉染后表皮細胞與成纖維細胞整合素β1蛋白的改變。通過潮霉素持續(xù)加壓篩選已轉染細胞，直到轉染細胞株單克隆形成。通過蛋白質印跡發(fā)現(xiàn)重組質粒siIntegrinβ1轉染表皮細胞與成纖維細胞